Luận án tiến sĩ: Biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm - Phạm Kiên Cường, ĐHQG Hà Nội
Luận án tiến sĩ HUS nghiên cứu chất lượng đất vùng Ramsar Xuân Thủy (Nam Định) dưới tác động nước biển dâng, đề xuất giải pháp bảo tồn bền vững.
Năm xuất bản
Số trang
133
Thời gian đọc
20 phút
Lượt xem
0
Lượt tải
0
Phí lưu trữ
40 Point
Tổng quan nhanh
- Chủ đề:
- 1. Phòng bệnh đốm trắng tôm: Giải pháp biểu hiện VP28
- Số trang:
- 133 trang
- Trường:
- Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội
- Chuyên ngành:
- Hóa sinh học
- Tác giả:
- Phạm Kiên Cường
- Năm:
- 2015
Tóm tắt nội dung luận án
I. Phòng bệnh đốm trắng tôm Giải pháp biểu hiện VP28
Bệnh đốm trắng do Virus đốm trắng (WSSV) là mối đe dọa lớn cho ngành nuôi tôm toàn cầu. WSSV gây ra thiệt hại kinh tế đáng kể, với tỷ lệ tử vong cao và không có phương pháp điều trị hiệu quả. Việc phát triển các biện pháp phòng ngừa an toàn và hiệu quả là cực kỳ cần thiết. Nghiên cứu này tập trung vào việc sử dụng kháng nguyên VP28 của WSSV. Mục tiêu là biểu hiện kháng nguyên này trên bề mặt bào tử Bacillus subtilis. Đây là một chiến lược đầy hứa hẹn để tạo ra vaccine đường miệng cho tôm. Giải pháp này kết hợp tính an toàn của B. subtilis với khả năng miễn dịch của VP28. Nó mở ra hướng mới trong phòng chống bệnh đốm trắng, hướng tới nuôi trồng thủy sản bền vững.
1.1. Thách thức từ Virus đốm trắng WSSV trên tôm
Bệnh đốm trắng gây tổn thất kinh tế nặng nề cho ngành nuôi tôm toàn cầu. Virus WSSV lây lan nhanh chóng, tỷ lệ tử vong cao. Hiện chưa có phương pháp điều trị hiệu quả. Phòng ngừa là giải pháp tối ưu. Nhu cầu vaccine hoặc biện pháp phòng bệnh an toàn cấp thiết. Nghiên cứu này tập trung giải quyết vấn đề đó.
1.2. Kháng nguyên VP28 Mục tiêu tiềm năng vaccine tôm
Protein VP28 là một protein vỏ chính của WSSV. VP28 đóng vai trò quan trọng trong quá trình lây nhiễm virus. Kháng nguyên VP28 đã được chứng minh khả năng kích thích đáp ứng miễn dịch. Protein này là ứng cử viên sáng giá cho việc phát triển vaccine phòng WSSV. Việc biểu hiện VP28 là bước then chốt.
1.3. Bào tử Bacillus subtilis Nền tảng phân phối vaccine an toàn
Bacillus subtilis là vi khuẩn có lợi, an toàn cho môi trường và sinh vật. Bào tử B. subtilis bền vững, dễ bảo quản và có thể sử dụng qua đường miệng. Khả năng biểu hiện protein ngoại lai trên bề mặt bào tử đã được khai thác. B. subtilis là hệ thống phân phối vaccine hứa hẹn cho nuôi trồng thủy sản.
II. Kháng nguyên VP28 và Virus đốm trắng WSSV ở tôm
Virus đốm trắng (WSSV) là tác nhân gây bệnh chính trong ngành nuôi tôm. WSSV có cấu trúc phức tạp, chứa nhiều protein vỏ, trong đó VP28 là một kháng nguyên quan trọng. Protein VP28 không chỉ đóng vai trò thiết yếu trong quá trình lây nhiễm của virus mà còn có khả năng kích hoạt phản ứng miễn dịch. Hiểu biết sâu sắc về cấu trúc và chức năng của WSSV, đặc biệt là VP28, là cơ sở để phát triển các chiến lược phòng bệnh hiệu quả. Hiện nay, các biện pháp phòng chống WSSV còn hạn chế, chủ yếu dựa vào quản lý môi trường. Do đó, nghiên cứu về VP28 và việc ứng dụng nó vào vaccine là hướng đi đầy triển vọng.
2.1. Cấu trúc và đặc điểm Virus đốm trắng WSSV
WSSV là một loại virus DNA sợi đôi, thuộc họ Nimaviridae. Virus có cấu trúc phức tạp với nhiều protein vỏ. WSSV gây bệnh trên nhiều loài giáp xác, đặc biệt là tôm. Sự hiểu biết về cấu trúc WSSV giúp xác định mục tiêu vaccine. Các nghiên cứu tập trung vào protein bề mặt virus.
2.2. Protein VP28 Vai trò trong lây nhiễm và miễn dịch
Protein VP28 là một trong những protein vỏ chính của WSSV. VP28 tham gia vào quá trình gắn virus vào tế bào chủ. Kháng thể chống VP28 có thể trung hòa virus. Điều này làm cho VP28 trở thành một kháng nguyên quan trọng. Gen mã hóa VP28 (vp28) được phân lập để nghiên cứu.
2.3. Chẩn đoán WSSV và các biện pháp phòng chống hiện tại
Chẩn đoán WSSV thường dựa trên các phương pháp sinh học phân tử như PCR. Các biện pháp phòng chống chủ yếu là quản lý môi trường, diệt mầm bệnh. Tuy nhiên, hiệu quả phòng ngừa WSSV còn hạn chế. Nhu cầu về các biện pháp phòng bệnh mới, hiệu quả cao hơn là cần thiết.
III. Bacillus subtilis Hệ thống biểu hiện kháng nguyên VP28
Bacillus subtilis là một loại vi khuẩn được công nhận là an toàn (GRAS), sở hữu khả năng hình thành bào tử bền vững. Những đặc tính này làm cho B. subtilis trở thành một nền tảng lý tưởng cho việc biểu hiện protein ngoại lai, đặc biệt là kháng nguyên VP28. Kỹ thuật biểu hiện kháng nguyên trên bề mặt bào tử, sử dụng các protein vỏ bào tử như CotB làm protein dung hợp, cho phép trình diện VP28 một cách hiệu quả. Hệ thống này hứa hẹn tạo ra một loại vaccine đường miệng an toàn, ổn định và dễ dàng sử dụng cho tôm. Việc này mang lại lợi ích kinh tế và môi trường, góp phần vào sự phát triển bền vững của ngành nuôi trồng thủy sản.
3.1. Đặc tính của Bacillus subtilis trong nuôi cấy và tạo bào tử
Bacillus subtilis là vi khuẩn Gram dương, có khả năng hình thành bào tử. Bào tử B. subtilis rất bền với điều kiện khắc nghiệt. Vi khuẩn này được coi là an toàn (GRAS) cho ứng dụng sinh học. Đặc tính này làm cho B. subtilis lý tưởng cho việc sản xuất vaccine đường miệng. Nuôi cấy B. subtilis tương đối dễ dàng và kinh tế.
3.2. Biểu hiện protein ngoại lai trên bề mặt bào tử B. subtilis
Kỹ thuật biểu hiện protein ngoại lai trên bề mặt bào tử đã được phát triển. Protein bề mặt của bào tử như CotB có thể được sử dụng làm protein dung hợp. Protein dung hợp CotB-VP28 được kỳ vọng sẽ hiển thị VP28 trên bề mặt. Phương pháp này cho phép kháng nguyên VP28 tiếp xúc trực tiếp với hệ miễn dịch.
3.3. Lợi ích của bào tử B. subtilis tái tổ hợp trong vaccine
Bào tử tái tổ hợp mang kháng nguyên VP28 có thể dùng làm vaccine đường miệng. Vaccine đường miệng giảm stress cho tôm và dễ dàng áp dụng. Tính bền vững của bào tử giúp vaccine ổn định. B. subtilis là hệ thống an toàn, thân thiện môi trường, phù hợp với nuôi trồng thủy sản bền vững.
IV. Phương pháp nghiên cứu gen VP28 trên bào tử B
Nghiên cứu được thực hiện theo quy trình chặt chẽ, bắt đầu từ việc thu nhận virus WSSV từ tôm nhiễm bệnh ở Việt Nam. Gen mã hóa VP28 (vp28) được nhân bản và nhân dòng. Sau đó, gen vp28 được biểu hiện trong hệ thống E. coli để sản xuất protein tái tổ hợp. Bước tiếp theo là chuyển gen vp28 vào Bacillus subtilis, thiết kế để biểu hiện VP28 dưới dạng dung hợp với protein CotB trên bề mặt bào tử. Quy trình này đảm bảo bào tử B. subtilis tái tổ hợp mang kháng nguyên VP28 có khả năng kích hoạt miễn dịch. Các phương pháp sinh học phân tử tiên tiến đã được áp dụng để xác định và kiểm tra tính hiệu quả của các bước.
4.1. Thu nhận gen vp28 từ mẫu WSSV và nhân bản
Virus gây bệnh đốm trắng được thu nhận từ mẫu tôm nhiễm bệnh ở Việt Nam. DNA của WSSV được tách chiết và định lượng. Đoạn gen mã hóa VP28 (vp28) được nhân bản bằng kỹ thuật PCR. Kỹ thuật PCR đảm bảo thu được lượng lớn gen đích.
4.2. Nhân dòng và biểu hiện gen vp28 trong hệ thống E. coli
Gen vp28 được nhân dòng vào vector pGEM-T. Trình tự gen vp28 được xác định và phân tích tính đa hình. Tiếp theo, gen được đưa vào hệ thống vector biểu hiện pET28b. Protein VP28 tái tổ hợp được biểu hiện trong tế bào E. coli. Việc này giúp sản xuất lượng lớn protein VP28 để nghiên cứu.
4.3. Chuyển gen vp28 vào B. subtilis và tạo bào tử tái tổ hợp
Gen vp28 được thiết kế để biểu hiện dưới dạng dung hợp với protein CotB. Protein CotB là protein bề mặt bào tử B. subtilis. Vector biểu hiện được chuyển vào B. subtilis. Sau đó, vi khuẩn được nuôi cấy để tạo ra bào tử tái tổ hợp. Bào tử này mang kháng nguyên VP28 trên bề mặt.
V. Kết quả biểu hiện gen VP28 và hiệu quả phòng bệnh
Nghiên cứu đã xác định thành công trình tự gen vp28 từ các chủng WSSV lưu hành tại Việt Nam, qua đó cung cấp thông tin quý giá về tính đa hình của gen. Quan trọng hơn, protein VP28 đã được biểu hiện thành công trên bề mặt bào tử Bacillus subtilis, tạo ra bào tử B. subtilis tái tổ hợp mang kháng nguyên. Các thử nghiệm trên tôm thẻ chân trắng cho thấy bào tử này có khả năng tồn tại trong ruột tôm và kích thích đáp ứng miễn dịch. Những kết quả ban đầu này chứng minh tiềm năng của bào tử B. subtilis biểu hiện VP28 trong việc phòng ngừa bệnh đốm trắng, mở ra triển vọng cho các ứng dụng thực tế trong nuôi trồng thủy sản.
5.1. Xác định trình tự và đặc điểm gen vp28 từ WSSV Việt Nam
Trình tự gen mã hóa VP28 (vp28) từ các chủng WSSV Việt Nam đã được xác định. Phân tích cho thấy tính đa hình của gen vp28. Thông tin này quan trọng cho việc thiết kế vaccine đặc hiệu. Kết quả xác nhận sự phù hợp của gen vp28 sử dụng.
5.2. Biểu hiện thành công protein VP28 trên bào tử B. subtilis
Protein VP28 được biểu hiện thành công trong E. coli dạng protein tái tổ hợp. Quan trọng hơn, VP28 cũng được biểu hiện dưới dạng dung hợp với CotB trên bề mặt bào tử B. subtilis. Sự hiện diện của VP28 trên bào tử được xác nhận bằng các kỹ thuật phân tích.
5.3. Khả năng phòng bệnh đốm trắng của bào tử B. subtilis VP28
Bào tử B. subtilis biểu hiện VP28 được thử nghiệm trên tôm thẻ chân trắng. Nghiên cứu đánh giá sự tồn tại của bào tử trong ruột tôm. Quan trọng hơn, khả năng kích thích miễn dịch trên tôm đã được khảo sát. Kết quả ban đầu cho thấy hiệu quả phòng bệnh đốm trắng khi tôm bị thử thách với WSSV.
VI. Ứng dụng bào tử B
Hệ thống bào tử Bacillus subtilis biểu hiện kháng nguyên VP28 mang lại tiềm năng to lớn cho việc phát triển vaccine đường miệng. Phương pháp này không chỉ an toàn và thân thiện môi trường mà còn góp phần giảm thiểu tổn thất kinh tế do bệnh đốm trắng. Vaccine đường miệng giúp đơn giản hóa quy trình tiêm phòng, giảm stress cho tôm và nâng cao hiệu quả nuôi trồng. Hướng phát triển này phù hợp với mục tiêu nuôi trồng thủy sản bền vững, đảm bảo an ninh lương thực và bảo vệ môi trường. Cần tiếp tục nghiên cứu để tối ưu hóa và thương mại hóa sản phẩm, mang lại lợi ích thiết thực cho ngành tôm Việt Nam và thế giới.
6.1. Tiềm năng vaccine đường miệng từ bào tử B. subtilis tái tổ hợp
Hệ thống bào tử B. subtilis biểu hiện VP28 mở ra hướng phát triển vaccine đường miệng. Vaccine đường miệng an toàn, dễ sử dụng, giảm stress cho tôm. Đây là lợi thế lớn so với vaccine tiêm truyền thống. Tiềm năng ứng dụng rộng rãi trong các trang trại nuôi tôm.
6.2. Lợi ích kinh tế và môi trường trong nuôi trồng thủy sản
Giải pháp này giúp giảm thiểu tổn thất do bệnh đốm trắng gây ra. Nâng cao hiệu quả sản xuất tôm, đảm bảo an ninh lương thực. B. subtilis là vi khuẩn an toàn, không gây ô nhiễm môi trường. Phù hợp với các tiêu chuẩn nuôi trồng thủy sản bền vững. Góp phần bảo vệ hệ sinh thái.
6.3. Hướng phát triển và thương mại hóa sản phẩm VP28 B. subtilis
Nghiên cứu đặt nền tảng cho việc phát triển sản phẩm thương mại. Cần tiếp tục tối ưu hóa quy trình sản xuất và thử nghiệm quy mô lớn. Hợp tác với các doanh nghiệp nuôi tôm để đưa sản phẩm ra thị trường. Góp phần vào sự phát triển bền vững của ngành thủy sản Việt Nam.
Mục lục chi tiết luận án
Tải xuống file đầy đủ để xem toàn bộ nội dung
Tải đầy đủ (133 trang)Trích đoạn nội dung luận án
Tải xuống để đọc toàn bộĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TƢ̣ NHIÊN Phạm Kiên Cƣờng NHÂN DÕNG VÀ BIỂU HIỆN TRÊN BỀ MẶT BÀO TỬ Bacillus subtilis GEN MÃ HÓA KHÁNG NGUYÊN VP28 CỦA VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG Ở TÔM LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội, 2015 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TƢ̣ NHIÊN Phạm Kiên Cƣờng NHÂN DÕNG VÀ BIỂU HIỆN TRÊN BỀ MẶT BÀO TỬ Bacillus subtilis GEN MÃ HÓA KHÁNG NGUYÊN VP28 CỦA VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG Ở TÔM Chuyên ngành: Hóa sinh học Mã số: 62 42 01 16 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: 1. Phan Tuấn Nghĩa 2. Nguyễn Thị Vân Anh Hà Nội, 2015 1 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trin ̀ h nghiên cƣ́u mà tôi đã th ực hiện dƣới sự hƣớng dẫn của GS. Phan Tuấn Nghĩa và PGS.
Nguyễn Thị Vân Anh. Các số liê ̣u, kế t quả nêu trong luâ ̣n án là trung thƣ̣c và chƣ a tƣ̀ng đƣơ ̣c ai công bố trong bấ t kỳ công trình nào khác. Phạm Kiên Cường 2 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến GS. Phan Tuấn Nghĩa, PGS.
Nguyễn Thi ̣ Vân Anh , những người thầy đã tận tình dìu dắt, hướng dẫn, động viên khích lệ và tạo mọi điều kiện tốt nhất cho tôi trong suốt quá trình làm luận án nghiên cứu sinh. Tôi xin chân thành cảm ơn đến toàn thể quý thầy, cô trong Bộ môn Sinh lý thực vật và Hóa sinh, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên đã truyền đạt cho tôi những kiến thức quý báu trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu. Tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi của Cấp ủy thủ trưởng Viện Công nghệ mới, Viện Khoa học và Công nghệ Quân sự, các anh chị bạn bè đồng nghiệp trong Viện Công nghệ mới, các thành viên trong nhóm nghiên cứu Phòng Protein tái tổ hợp và Phòng Sinh học nano và ứng dụng, thuộc Phòng Thí nghi ệm trọng điểm Công nghê ̣ Enzym và Protein, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên. Tôi xin gửi lời cảm ơn đ ến Ban Giám hiệu, Phòng Sau Đại học , Ban Chủ nhiệm Khoa Sinh học và các Phòng ch ức năng của Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội đã tạo điề u kiê ̣n cho tôi h ọc tập, hoàn thành các thủ tục cần thiết của một nghiên cứu sinh.
Tôi xin chân thành cám ơn đến TS. Đặng Thị Lụa, Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I và TS. Trần Thị Tuyết Hoa, Khoa Thủy sản Trường Đại học Cần Thơ đã nhiệt tình giúp đỡ, cung cấp và chia sẻ thông tin trong quá trình thử ng hiê ̣m ứng dụng thực tế sản phẩm của đề tài luận án. Luận án đã được thực hiện với sự tài trợ kinh phí của đề tài thuộc chương trình Trọng điểm cấp nhà nước do Bộ Khoa học và Công nghệ tài trợ, mã số KC.09/11-15 và bản thân tôi cũng đã được hỗ trợ kính phí làm thực nghiệm với tư cách là một nghiên cứu sinh của đề tài.
Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn tới bố , mẹ, vợ, con, gia đình, những người đã luôn bên tôi, cổ vũ, động viên và tạo điề u kiê ̣n thuận lợi nhất cho tôi có thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận án. Phạm Kiên Cường 3 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Trang MỤC LỤC.1 DANH MỤC CÁC KÝ HIÊU ̣ VÀ CHỮ VIẾT TẮT.3 DANH MỤC BẢNG .7 DANH MỤC HÌNH. TỔNG QUAN TÀI LIỆU. GIỚI THIỆU CHUNG VỀ VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG Ở TÔM.
Vị trí phân loại của virus gây bệnh đốm trắng ở tôm. Cấu trúc của WSSV. Hệ gen của WSSV. Bệnh đốm trắng do WSSV gây ra ở tôm.
Chẩn đoán WSSV. NGHIÊN CỨU TẠO VACCINE DỰA TRÊN KHÁNG NGUYÊN VỎ WSSV. Một số biện pháp phòng chống WSSV. Protein VP28 và nghiên cứu tạo vaccine phòng WSSV.
Các protein bề mặt khác và nghiên cứu tạo vaccine phòng WSSV. subtilis VÀ BIỂU HIỆN PROTEIN NGOẠI LAI TRÊN BỀ MẶT BÀO TỬ TRONG NGHIÊN CỨU TẠO VACCINE. subtilis và đặc tính hình thành bào tử. Một số protein bề mặt của B.
Biểu hiện protein ngoại lai trên bề mặt bào tử. Mẫu tôm thử nghiệm. Các hoá chất và nguyên vật liệu. MÁY MÓC VÀ TRANG THIẾT BỊ.
PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.56 4 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Thu nhận virus gây bệnh đốm trắng từ mẫu tôm nhiễm bệnh .2 Nuôi cấy tạo bào tử B. Tách chiết, định lƣợng DNA. Nhân dòng, biểu hiện VP28 trong E.
Phát hiện, định lƣợng và tinh sạch VP28. Thử nghiệm khả năng phòng WSSV của bào tử B. subtilis tái tổ hợp. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.
NHÂN DÕNG, XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ VÀ MỘT SỐ ĐẶC TRƢNG CỦA GEN vp28 TỪ CÁC MẪU WSSV THU NHẬN Ở VIỆT NAM. Nhân bản đoa ̣n gen mã hóa VP28 bằ ng PCR. Nhân dòng gen mã hóa VP28 vào vector pGEM-T. Xác định trình tự và nghiên cứu tính đa hình của gen mã hóa VP28.
NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA VP28. Biể u hiê ̣n VP28 bằng hệ thống vector pET28b trong E. Biểu hiện VP28 dạng dung hợp với protein CotB trên bề mặt bào tử B. KHẢ NĂNG PHÕNG BỆNH ĐỐM TRẮNG TRÊN TÔM THẺ CHÂN TRẮNG CỦA BÀO TỬ B.
subtilis BIỂU HIỆN VP28 TRÊN BỀ MẶT. Sự tồn tại của bào tử B. subtilis biểu hiện VP28 trong ruột tôm thẻ chân trắng. Khả năng kích thích miễn dịch trên tôm thẻ chân trắng của bào tử B.
subtilis biểu hiện VP28. Đánh giá khả năng bảo hộ trên tôm thẻ chân trắng của bào tử tái tổ hợp .114 DANH MỤC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN .115 TÀI LIỆU THAM KHẢO .116 5 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT BCIP 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate BSA Albumin huyết thanh bò (Bovine Serum Albumin) Cm Chloramphenicol dNTP Deoxyribonucleoside triphosphate DSM Môi trƣờng tạo bào tử Difco (Difco Sporulation medium) EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid GST Glutathione S-transferase IPTG Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside kDa Kilodalton LB Luria Bertani NBT p- nitro blue tetrazolium chloride PAGE Điện di gel polyacrylaminde (Polyarylamide Gel Electrophoresis) PBS Muối chứa đệm phosphate (Phosphate Buffered Saline) PCR Phản ứng chuỗi polymerase (Polymerase Chain Reaction) PVDF Polyvinylidere Fluoride SDS Sodium Dodecyl Sulphate GST Glutathione S-transferase TSA Tryptic Soy Agar TTFC Phân đoạn đầu C của độc tố uốn ván (C- terminal fragment of the tetanus toxin) WSSV Virus gây bệnh đốm trắng (White Spot Syndrome Virus) 6 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Tên gọi của virus gây bệnh đốm trắng qua từng giai đoạn .2: Các gen mã hóa protein cấu trúc của WSSV .3: Một số giáp xác nhiễm bệnh đốm trắng .4: Các chiến lƣợc vaccine chống WSSV để bảo vệ tôm .5: Một số protein trong lớp áo bào tử vi khuẩn B.1: Trình tự các cặp mồi sƣ̉ du ̣ng trong nghiên cƣ́u nhân bản và biể u hiê ̣n gen vp28 .2: Thành phần phản ứng PCR .3: Thành phần phản ứng Real-time PCR .4: Thành phần gel cô và gel tách acrylamide trong SDS-PAGE. 1: Các mẫu tôm nhiễm WSSV thu nhận từ các địa điểm khác nhau .2: Một số sai khác về trình tự nucleotide và acid amin của VP28 thu nhận tại Việt Nam so với trình tự đã công bố (AY168644) .3: Sự hình thành sinh khối bào tử B. subtilis tái tổ hợp trên một số môi trƣờng khác nhau .4: Sự hình thành bào tử tái tổ hợp trên môi trƣờng DSM ở các thời gian khác nhau.5: Độ sống vi khuẩn ở mẫu thức ăn trộn bào tử B.
subtilis biểu hiện VP28 .6: Số copy trong từng dung dịch WSSV .107 7 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌ NH Hình 1.1: Vị trí của WSSV trong cây phát sinh chủng loại [124] .2: Cấu trúc của virion WSSV dƣới kính hiển vi điện tử [54] .3: Hình ảnh mô ruột của tôm (Procambarus clarkii) sau 48 giờ lây nhiễm WSSV dƣới kính hiển vi điện tử .4: Vị trí các protein cấu trúc chính của WSSV [97] .5: Cấu trúc liên kết màng của VP19, VP24, VP26, VP28 và VP51A [21].6: Mô hình 3D phức hợp protein vỏ xuyên màng [21] .7: Mô hình tổ chức hệ gen trên DNA vòng sợi đôi của WSSV-CN .8: Bản gel SDS-PAGE 12% nhuộm Coomassie Brilliant Blue (CBB) của protein vỏ WSSV (EP) và protein lõi nucleocapsid (NP) [120] .9: Tôm sú bị bệnh đốm trắng, dƣới vỏ đầu ngực thấy rõ các đốm trắng [6].10: Sơ đồ của hệ thống miễn dịch ở tôm [98] .11: Cơ chế kích thích miễn dịch không đặc hiệu của tôm khi bị kích thích bởi β-glucan [3].12: Cấu trúc không gian của protein VP28 [97] .13: Hình dạng ngoài của nội bào tử B.14: Cấu tạo nội bào tử B.15: Mô hiǹ h bi ểu hiện protein ngoa ̣i trên b ề mặt bào tử B. subtilis sử dụng protein của lớp áo bào tử. Protein dung hợp gồm phần màu xanh dƣơng là protein chuyên chở và phần màu hồng là một protein ngoại lai [74] .1: Nhân bản vp28 bằng PCR từ các mẫu tôm nhiễm WSSV ở các địa điểm 73 Hình 3.2: Điện di gel agarose sản phẩm PCR kiểm tra sự có mặt của vp28 trong các thể biến nạp sử dụng cặp mồi pGEM Fw/Rv và cặp mồi VP28.3: So sánh mức độ tƣơng đồng giữa trình tự nucleotide của gen vp28 từ các mẫu WSSV thu thâ ̣p đƣơ ̣c và trình tƣ̣ vp28 Việt Nam đã công bố trƣớc đây (AY168644) .77 8 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 3.4: Điện di gel agarose sản phẩm cắt vector biểu hiện và vector nhân dòng mang gen vp28 bằng enzyme giới hạn sau khi tinh sạch .5: Điện di sản phẩm PCR kiểm tra sự có mặt của gen vp28 trong các khuẩn lạc .6: SDS-PAGE (A) và thẩm tách miễn dịch (B) kiểm tra biểu hiện VP28 ở E.7: SDS-PAGE (A) và thẩm tách miễn dịch (B) kiểm tra độ tinh sạch của VP28 .8: Điện di sản phẩm cắt giới hạn pDG364-cotB-gst-sep, pDG364-cotB, pGEM-vp28 với hai cặp enzyme EcoRI và HindIII .9A: Điện di sản phẩm PCR kiể m tra các khuẩ n la ̣c t ừ đĩa thạch biến nạp sản phẩm gắn của gen mã hóa VP28 và pDG364-cotB bằ ng că ̣p mồ i vp 28, cotB và pDG364 .9B: Điện di sản phẩm PCR kiể m tra các khuẩ n la ̣c t ừ đĩa thạch biến nạp sản phẩm gắn của gen mã hóa VP28 và pDG364-cotB-GST bằ ng că ̣p mồ i pDG 364 và vp28.
Nội dung được bảo vệ bản quyền — Tải xuống đầy đủ
Trích dẫn luận án này
Phạm Kiên Cường (2015). Nghiên cứu biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm [Luận án tiến sĩ, Đại học Quốc gia Hà Nội - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên]. LuanAn.net. https://luanan.net/khoa-hoc-trai-dat-moi-truong/moi-truong-tai-nguyen/nghien-cuu-bieu-hien-gen-vp28-bacillus-subtilis-phong-benh-dom-trang-o-tom
Câu hỏi thường gặp
Luận án "Nghiên cứu biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm" nghiên cứu về vấn đề gì?
Luận án tiến sĩ HUS nghiên cứu chất lượng đất vùng Ramsar Xuân Thủy (Nam Định) dưới tác động nước biển dâng, đề xuất giải pháp bảo tồn bền vững.
Luận án "Nghiên cứu biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm" được bảo vệ tại trường nào?
Luận án này được bảo vệ tại Đại học Quốc gia Hà Nội - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên. Năm bảo vệ: 2015.
Luận án "Nghiên cứu biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm" thuộc chuyên ngành gì?
Luận án "Nghiên cứu biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm" thuộc chuyên ngành Hóa sinh học. Danh mục: Môi Trường & Tài Nguyên.
Luận án "Nghiên cứu biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm" có bao nhiêu trang?
Luận án "Nghiên cứu biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm" có 133 trang. Bạn có thể xem trước một phần tài liệu ngay trên trang web trước khi tải về.
Cách tải luận án "Nghiên cứu biểu hiện gen VP28 trên bào tử Bacillus subtilis phòng bệnh đốm trắng ở tôm" về máy như thế nào?
Để tải luận án về máy, bạn nhấn nút "Tải xuống ngay" trên trang này, sau đó hoàn tất thanh toán phí lưu trữ. File sẽ được tải xuống ngay sau khi thanh toán thành công. Hỗ trợ qua Zalo: 0559 297 239.