Luận án tiến sĩ Hóa học: Chiết tách, cấu trúc hợp chất xạ khuẩn Việt Nam - Huỳnh Thị Ngọc Ni
Luận án nghiên cứu chiết tách, xác định cấu trúc hóa học và đánh giá tác động của các hợp chất từ xạ khuẩn Việt Nam lên protein tái tổ hợp ClpC1.
Hóa học
Luan An
Luận án tiến sĩ
Năm xuất bản
Số trang
133
Thời gian đọc
20 phút
Lượt xem
0
Lượt tải
0
Phí lưu trữ
40 Point
Mục lục chi tiết
Tóm tắt nội dung
I. Khám phá Xạ khuẩn Việt Nam Nguồn hợp chất mới
Xạ khuẩn Việt Nam là nguồn tài nguyên sinh học quý giá. Chúng mang tiềm năng lớn trong việc phát hiện các hợp chất tự nhiên mới. Nghiên cứu này khai thác sự đa dạng của chúng. Mục tiêu là tìm kiếm các ứng viên dược phẩm, đặc biệt là chống lại bệnh lao kháng thuốc.
1.1. Giới thiệu Xạ khuẩn và vai trò y học
Xạ khuẩn là vi sinh vật đất. Chúng sản xuất nhiều hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học. Nhiều loại kháng sinh hiện nay có nguồn gốc từ xạ khuẩn. Việt Nam có đa dạng sinh học phong phú. Các loài xạ khuẩn tại Việt Nam là nguồn tiềm năng cho việc tìm kiếm thuốc mới. Đặc biệt, chúng có thể chống lại các bệnh truyền nhiễm. Nghiên cứu này tập trung vào xạ khuẩn Việt Nam. Mục tiêu là khám phá các hợp chất mới. Các hợp chất này có thể có tác động kháng khuẩn hoặc các tác dụng sinh học khác.
1.2. Thực trạng bệnh lao và nhu cầu thuốc mới
Bệnh lao vẫn là một thách thức lớn toàn cầu. Vi khuẩn lao đã phát triển khả năng kháng thuốc. Tình trạng kháng thuốc đang diễn biến phức tạp. Nhiều loại thuốc hiện tại không còn hiệu quả. Nhu cầu cấp thiết về các hợp chất kháng lao mới. Các hợp chất này cần có cơ chế tác động khác biệt. Xạ khuẩn Việt Nam là nguồn hứa hẹn. Chúng cung cấp các ứng viên thuốc tiềm năng. Việc tìm kiếm hợp chất mới từ nguồn này là rất quan trọng. Điều này góp phần vào công cuộc phòng chống lao.
II. Chiết tách cấu trúc hợp chất từ xạ khuẩn
Việc chiết tách và phân lập hợp chất là bước cơ bản. Sau đó, xác định cấu trúc hóa học là trọng tâm. Các kỹ thuật phân tích hiện đại được áp dụng. Mục đích là để nhận diện chính xác các hợp chất mới.
2.1. Quy trình chiết tách và phân lập hợp chất
Quy trình bắt đầu bằng nuôi cấy xạ khuẩn. Các chủng xạ khuẩn được thu thập từ Việt Nam. Môi trường nuôi cấy được tối ưu hóa. Điều này nhằm kích thích sản xuất hợp chất thứ cấp. Dịch nuôi cấy được thu hoạch. Các phương pháp chiết tách dung môi được áp dụng. Sau đó là các kỹ thuật sắc ký. Sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng được sử dụng. Phân lập các hợp chất tinh khiết là mục tiêu chính. Các bước này đảm bảo thu được đủ lượng hợp chất. Chất lượng hợp chất tinh khiết rất quan trọng.
2.2. Xác định cấu trúc hóa học phức tạp
Cấu trúc hóa học của hợp chất được xác định. Nhiều kỹ thuật phân tích được sử dụng. Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) là công cụ chính. Phổ khối (MS) cung cấp thông tin khối lượng phân tử. Phổ hồng ngoại (IR) và phổ tử ngoại-khả kiến (UV-Vis) bổ sung dữ liệu. Phân tích tinh thể nhiễu xạ tia X cung cấp cấu trúc không gian 3D. Các dữ liệu này được phân tích tổng hợp. Điều này giúp xác định chính xác cấu trúc. Cấu trúc hóa học là nền tảng. Nó giúp hiểu rõ hơn về hoạt tính sinh học.
III. Protein ClpC1 Mục tiêu kháng lao mới
Protein ClpC1 đóng vai trò thiết yếu cho sự sống của vi khuẩn lao. Điều này biến nó thành một mục tiêu hấp dẫn. Ức chế ClpC1 có thể mở ra hướng mới. Nó giúp phát triển các loại thuốc kháng lao hiệu quả hơn.
3.1. Giới thiệu về protein ClpC1 của vi khuẩn lao
Protein ClpC1 là một protein quan trọng. Nó thuộc họ protein chaperone của vi khuẩn lao. ClpC1 tham gia vào quá trình phân hủy protein. Nó cũng đóng vai trò trong phản ứng stress của vi khuẩn. ClpC1 rất cần thiết cho sự sống sót của Mycobacterium tuberculosis. Vi khuẩn lao không thể sống nếu thiếu ClpC1. Điều này làm cho ClpC1 trở thành mục tiêu hấp dẫn. Đây là mục tiêu cho việc phát triển thuốc kháng lao mới. Việc ức chế ClpC1 có thể tiêu diệt vi khuẩn.
3.2. Tầm quan trọng của ClpC1 trong phát triển thuốc
Kháng thuốc là vấn đề nghiêm trọng. Các loại thuốc hiện tại thường nhắm vào các mục tiêu đã biết. Việc tìm kiếm mục tiêu mới là cần thiết. ClpC1 cung cấp một hướng tiếp cận mới. Các hợp chất ức chế ClpC1 có thể là thuốc mới. Chúng có thể có cơ chế tác động khác biệt. Điều này giúp vượt qua tình trạng kháng thuốc. Nghiên cứu tập trung vào tái tổ hợp protein ClpC1. Protein này được sử dụng để sàng lọc hợp chất. Việc đánh giá tác động lên ClpC1 là bước quan trọng. Nó xác định tiềm năng kháng lao của hợp chất.
IV. Đánh giá tác động hợp chất lên protein ClpC1
Các hợp chất được sàng lọc cẩn thận. Mục tiêu là đánh giá khả năng tương tác với protein ClpC1. Điều này xác định tiềm năng kháng lao của chúng. Nó cũng làm rõ cơ chế tác động ở cấp độ phân tử.
4.1. Phương pháp sàng lọc hoạt tính in vitro
Các hợp chất tinh khiết được kiểm tra. Chúng được đánh giá tác động lên protein ClpC1 tái tổ hợp. Các phương pháp sinh hóa và sinh học phân tử được sử dụng. Các thử nghiệm in vitro được thiết lập. Chúng đo lường khả năng ức chế hoạt động của ClpC1. Sự tương tác giữa hợp chất và protein được quan sát. Các kỹ thuật như ELISA, quang phổ huỳnh quang có thể được dùng. Kết quả cung cấp thông tin định lượng. Nó chỉ ra mức độ hiệu quả của từng hợp chất.
4.2. Cơ chế tác động phân tử và tiềm năng kháng lao
Phân tích cơ chế tác động rất quan trọng. Nó giúp hiểu cách hợp chất tương tác với ClpC1. Một số hợp chất có thể ức chế trực tiếp. Số khác có thể thay đổi cấu hình protein. Các nghiên cứu này làm rõ tính đặc hiệu. Hợp chất ức chế ClpC1 có thể có tiềm năng. Chúng là ứng viên cho thuốc kháng lao mới. Việc xác định cơ chế phân tử là bước đệm. Nó phục vụ cho việc tối ưu hóa cấu trúc. Từ đó, phát triển các loại thuốc hiệu quả hơn.
V. Tiềm năng ứng dụng xạ khuẩn Việt Nam trong y học
Nghiên cứu mở ra hướng mới trong y học. Xạ khuẩn Việt Nam là nguồn tài nguyên phong phú. Chúng đóng góp vào phát triển thuốc mới. Điều này đặc biệt quan trọng trong cuộc chiến chống bệnh truyền nhiễm.
5.1. Đóng góp vào nghiên cứu và phát triển thuốc mới
Nghiên cứu này đóng góp lớn. Nó mở ra hướng mới cho phát triển thuốc. Các hợp chất từ xạ khuẩn Việt Nam được khám phá. Chúng có hoạt tính tiềm năng chống lại vi khuẩn lao. Đặc biệt là các chủng kháng thuốc. Việc xác định cấu trúc và cơ chế tác động là cơ sở. Nó cho phép các nghiên cứu sâu hơn. Đây là bước đầu quan trọng. Nó hướng tới việc đưa các hợp chất này vào thử nghiệm lâm sàng.
5.2. Tầm quan trọng của bảo tồn đa dạng sinh học
Xạ khuẩn Việt Nam là nguồn tài nguyên quý giá. Việc nghiên cứu và bảo tồn đa dạng sinh học là cần thiết. Nhiều loài xạ khuẩn chưa được khám phá. Mỗi loài có thể chứa các hợp chất độc đáo. Bảo tồn môi trường sống của xạ khuẩn giúp duy trì nguồn gen. Điều này đảm bảo tiềm năng phát triển dược phẩm lâu dài. Việc khai thác bền vững là chìa khóa. Nó giúp bảo vệ nguồn tài nguyên thiên nhiên.
VI. Các loài xạ khuẩn tiêu biểu Streptomyces Actinoplanes
Nghiên cứu tập trung vào các chi xạ khuẩn nổi bật. Streptomyces và Actinoplanes là hai chi chính. Chúng được chọn vì tiềm năng sinh học cao. Việc khám phá các loài này giúp tìm ra hợp chất độc đáo.
6.1. Khám phá tiềm năng từ Streptomyces spp.
Streptomyces là chi xạ khuẩn phổ biến nhất. Chi này nổi tiếng với khả năng sản xuất kháng sinh. Nhiều hợp chất kháng lao đã được phân lập từ Streptomyces. Nghiên cứu này tập trung vào các chủng Streptomyces từ Việt Nam. Các chủng như Streptomyces alboniger, S. wuyuanensis, S. aureus, S. spiroverticillatus, S. cyaneus được khảo sát. Mục tiêu là tìm kiếm các hợp chất mới. Chúng có thể có hoạt tính ức chế ClpC1.
6.2. Vai trò của Actinoplanes missouriensis
Actinoplanes là chi xạ khuẩn hiếm. Chúng cũng là nguồn tiềm năng của các hợp chất sinh học. Actinoplanes missouriensis là một trong các loài được nghiên cứu. Các đặc điểm hình thái và sinh hóa của loài này được ghi nhận. Việc phân lập hợp chất từ Actinoplanes mở rộng phạm vi khám phá. Các hợp chất từ chi này có thể có cấu trúc độc đáo. Chúng có thể mang lại cơ hội mới trong phát triển thuốc.
Tải xuống file đầy đủ để xem toàn bộ nội dung
Tải đầy đủ (133 trang)Trích đoạn nội dung luận án
Tải xuống để đọc toàn bộBà GIÁO DĀC VIàN HÀN LÂM KHOA HàC VÀ ĐÀO T¾O VÀ CÔNG NGHà VIàT NAM HàC VIÞN KHOA HàC VÀ CÔNG NGHÞ ----------------------------- HUþNH THÞ NGàC NI NGHIÊN CĄU CHI¾T TÁCH, XÁC ĐÞNH CÂU TRÚC HOÁ HàC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐÞNG TàI PROTEIN TÁI Tà HþP ClpC1 CĂA CÁC HþP CHÂT TĆ MÞT SÞ LOÀI X¾ KHUÆN VIÞT NAM LUÀN ÁN TI¾N SĨ HÓA HàC HÀ NÞI - 2024 Bà GIÁO DĀC VIàN HÀN LÂM KHOA HàC VÀ ĐÀO T¾O VÀ CÔNG NGHà VIàT NAM HàC VIÞN KHOA HàC VÀ CÔNG NGHÞ ----------------------------- HUþNH THÞ NGàC NI NGHIÊN CĄU CHI¾T TÁCH, XÁC ĐÞNH CÂU TRÚC HOÁ HàC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐÞNG TàI PROTEIN TÁI Tà HþP ClpC1 CĂA CÁC HþP CHÂT TĆ MÞT SÞ LOÀI X¾ KHUÆN VIÞT NAM LUÀN ÁN TI¾N SĨ HÓA HàC Mã sß: 9 44 01 14 Xác nhÁn căa Hác vißn Ng°ãi h°áng d¿n 1 Ng°ãi h°áng d¿n 2 Khoa hác và Công nghß (Ký, ghi rõ họ tên) (Ký, ghi rõ họ tên) PGS. TrÅn Thß Ph°¢ng ThÁo GS. TrÅn Văn Sung HÀ NÞI – 2024 LâI CAM ĐOAN Tôi xin cam oan luận án: "Nghiên cứu chiết tách, xác ßnh cÁu trúc hoá hác và ánh giá tác áng tới protein tái tổ hÿp ClpC1 căa các hÿp chÁt từ mát số loài x¿ khuẩn Viát Nam" là công trình nghiên cứu căa chính mình dưới sự hướng dẫn khoa hác căa PGS. Trần Thß Phương Th¿o và GS.
Luận án sử dāng thông tin trích dẫn từ nhiều nguồn tham kh¿o khác nhau và các thông tin trích dẫn ưÿc ghi rõ nguồn gốc. Các kết qu¿ nghiên cứu căa tôi ưÿc công bố chung với các tác gi¿ khác ã ưÿc sự nhÁt trí căa ồng tác gi¿ khi ưa vào luận án. Các số liáu, kết qu¿ ưÿc trình bày trong luận án là hoàn toàn trung thực và chưa từng ưÿc công bố trong bÁt kỳ mát công trình nào khác ngoài các công trình công bố căa tác gi¿. Luận án ưÿc hoàn thành trong thßi gian tôi làm nghiên cứu sinh t¿i Hác vián Khoa hác và Công nghá, Vián Hàn lâm Khoa hác và Công nghá Viát Nam.
Hà Nội, ngày tháng năm 2024 Tác gi¿ luận án Huÿnh Thß Ngác Ni LâI CÀM ¡N Với lòng biết ơn chân thành và sâu sắc, tôi xin gửi ến GS. Trần Văn Sung và PGS. Trần Thß Phương Th¿o ã tận tình hướng dẫn, t¿o mái iều kián thuận lÿi cho tôi trong thßi gian thực hián các chuyên ề và luận án. Tôi cũng xin gửi lßi c¿m ơn ến các cán bá nghiên cứu phòng Tổng hÿp hữu cơ, các thầy cô, các nhà khoa hác Vián Hóa hác-Vián Hàn lâm Khoa hác và Công nghá Viát Nam ã gi¿ng d¿y, hướng dẫn tôi trong suốt thßi gian thực hián chuyên ề và luận án.
Tôi xin trân tráng c¿m ơn sự giúp ỡ và t¿o iều kián thuận lÿi căa Ban Lãnh ¿o, phòng Đào t¿o, các phòng chức năng căa Hác vián Khoa hác và Công nghá trong suốt quá trình hác tập và hoàn thành luận án. Tôi xin trân tráng c¿m ơn Ban lãnh ¿o Trưßng Đ¿i hác Phú Yên, Ban lãnh ¿o Vián Hóa hác, Vián Hàn lâm Khoa hác và Công nghá Viát Nam ã t¿o mái iều kián thuận lÿi cho tôi trong thßi gian hác tập và hoàn thành các chuyên ề và luận án. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ến toàn thể gia ình, ồng nghiáp và b¿n bè ã ăng há và áng viên tôi trong suốt chặng ưßng dài hác tập và thực hián các chuyên ề và luận án. Tôi xin trân tráng c¿m ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2024 Tác gi¿ luận án Huÿnh Thß Ngác Ni i MĀC LĀC DANH MĀC CÁC KÝ HIÞU, CHĀ VI¾T TÂT.
vii DANH MĀC HÌNH. Tình hình bßnh lao å Vißt Nam và th¿ giái – Tình hình kháng thußc å vi khuÇn lao. Tình hình bệnh lao ở Việt Nam và thế giới. Tình trạng kháng thuốc ở vi khuẩn lao tại Việt Nam và trên thế giới.
Các hÿp chÃt kháng lao đ°ÿc phân lÁp tć x¿ khuÇn trên th¿ giái và å Vißt Nam. Giới thiệu về xạ khuẩn. Các hợp chất kháng lao được phân lập từ xạ khuẩn trên thế giới. Hợp chất kháng lao thuộc nhóm aminoglycoside.
Hợp chất kháng lao thuộc nhóm nitroimidazole. Hợp chất kháng lao thuộc nhóm macrolide. Hợp chất kháng lao thuộc nhóm cyclopeptide. Hợp chất kháng lao thuộc nhóm diaza-anthracene.
Hợp chất kháng lao thuộc nhóm polyketide. Các hợp chất kháng lao được phân lập từ xạ khuẩn ở Việt Nam. Táng quan về mßt sß loài x¿ khuÇn là đßi t°ÿng nghiên cąu. Chủng xạ khuẩn Streptomyces alboniger.
Đặc điểm hình thái của chủng x¿ khuẩn Streptomyces alboniger. Các hợp chất thứ cấp có ho¿t tính sinh học được phân lập từ x¿ khuẩn Streptomyces alboniger. Chủng xạ khuẩn Streptomyces wuyuanensis. Chủng xạ khuẩn Streptomyces aureus.
Đặc điểm hình thái của chủng x¿ khuẩn Streptomyces aureus. Các hợp chất thứ cấp có ho¿t tính sinh học được phân lập từ x¿ khuẩn Streptomyces aureus. Chủng xạ khuẩn Streptomyces spiroverticillatus. Đặc điểm hình thái của chủng x¿ khuẩn Streptomyces spiroverticillatus.
Các hợp chất thứ cấp có ho¿t tính sinh học được phân lập từ x¿ khuẩn Streptomyces spiroverticillatus. Chủng xạ khuẩn Streptomyces cyaneus. Đặc điểm hình thái của chủng x¿ khuẩn Streptomyces cyaneus. Các hợp chất thứ cấp có ho¿t tính sinh học được phân lập từ x¿ khuẩn Streptomyces cyaneus.
Chủng xạ khuẩn Actinoplanes missouriensis. Đặc điểm hình thái của chủng x¿ khuẩn Actinoplanes missouriensis. Các hợp chất thứ cấp có ho¿t tính sinh học được phân lập từ x¿ khuẩn Actinoplanes missouriensis. Táng quan về protein ClpC1.
ĐÞI T¯þNG, PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĄU VÀ THĂC NGHIÞM. Xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces. Xạ khuẩn hiếm thuộc chi Actinoplanes. Hoá chÃt, thi¿t bß nghiên cąu.
Ph°¢ng pháp nghiên cąu. Phương pháp thu thập và phân lập chủng xạ khuẩn. Phương pháp thu thập chủng x¿ khuẩn. Phương pháp phân lập chủng x¿ khuẩn.
Phương pháp tạo cao chiết từ dịch nuôi cấy của các chủng xạ khuẩn 36 2. Phương pháp phân lập các hợp chất thứ cấp từ cao chiết. Phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất thứ cấp phân lập được. Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học.
Phương pháp đánh giá ho¿t tính kháng vi khuẩn tương đồng vi khuẩn lao Mycobacterium smegmatis. Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế protein ClpC1 của vi khuẩn lao. Chi¿t xuÃt và phân lÁp các chÃt tć dßch nuôi cÃy căa các chăng x¿ khuÇn40 2. Chiết xuất và phân lập các chất từ dịch nuôi cấy của xạ khuẩn Streptomyces alboniger VH19-A121.
Chiết xuất và phân lập các chất từ dịch nuôi cấy của xạ khuẩn Streptomyces wuyuanensis VH19-A079. Chiết xuất và phân lập các chất từ dịch nuôi cấy của xạ khuẩn iii Streptomyces aureus VTCC43181. Chiết xuất và phân lập các chất từ dịch nuôi cấy của xạ khuẩn Streptomyces spiroverticillatus VH19-A067. Chiết xuất và phân lập các chất từ dịch nuôi cấy của xạ khuẩn Streptomyces alboniger VH19-A105B.
Chiết xuất và phân lập các chất từ dịch nuôi cấy của xạ khuẩn Streptomyces cyaneus VTCC43860. Chiết xuất và phân lập các chất từ dịch nuôi cấy của xạ khuẩn Streptomyces sp. Chiết xuất và phân lập các chất từ dịch nuôi cấy của xạ khuẩn Actinoplanes missouriensis VTCC40900. K¾T QUÀ VÀ THÀO LUÀN.
K¿t quÁ phân lÁp và đßnh danh các chăng x¿ khuÇn. Phân lập chủng xạ khuẩn. Sàng lọc các chủng xạ khuẩn có khả năng kháng Mycobacterium smegmatis. Phân loại các chủng xạ khuẩn.
K¿t quÁ xác đßnh cÃu trúc căa các chÃt đ°ÿc phân lÁp tć dßch nuôi cÃy chăng x¿ khuÇn. Biện luận cấu trúc hóa học các hợp chất từ xạ khuẩn Streptomyces alboniger VH19-A121. Biện luận cấu trúc hóa học hợp chất từ xạ khuẩn Streptomyces wuyuanensis VH19-A079. Biện luận cấu trúc hóa học các hợp chất từ xạ khuẩn Streptomyces aureus VTCC43181.
Biện luận cấu trúc hóa học hợp chất từ xạ khuẩn Streptomyces spiroverticillatus VH19-A067. Biện luận cấu trúc hóa học các hợp chất từ xạ khuẩn Streptomyces alboniger VH19-A105B. Biện luận cấu trúc hóa học hợp chất từ xạ khuẩn Streptomyces cyaneus VTCC43860. Biện luận cấu trúc hóa học hợp chất từ xạ khuẩn Streptomyces sp.
Biện luận cấu trúc hóa học các hợp chất từ xạ khuẩn Actinoplanes missouriensis VTCC40900. K¿t quÁ đánh giá ho¿t tính căa các chÃt s¿ch phân lÁp đ°ÿc. Hoạt tính kháng chủng Mycobacterium smegmatis. Đánh giá hoạt tính ATPase của protein tái tổ hợp ClpC1 .95 K¾T LUÀN VÀ KI¾N NGHÞ .100 DANH MĀC CÔNG TRÌNH CĂA TÁC GIÀ.102 TÀI LIÞU THAM KHÀO .
Nội dung được bảo vệ bản quyền — Tải xuống đầy đủ
Câu hỏi thường gặp
Luận án "Xạ khuẩn Việt Nam: Chiết tách, cấu trúc, tác động protein ClpC1" nghiên cứu về vấn đề gì?
Luận án nghiên cứu chiết tách, xác định cấu trúc hóa học và đánh giá tác động của các hợp chất từ xạ khuẩn Việt Nam lên protein tái tổ hợp ClpC1.
Luận án "Xạ khuẩn Việt Nam: Chiết tách, cấu trúc, tác động protein ClpC1" được bảo vệ tại trường nào?
Luận án này được bảo vệ tại Học viện Khoa học và Công nghệ. Năm bảo vệ: 2024.
Luận án "Xạ khuẩn Việt Nam: Chiết tách, cấu trúc, tác động protein ClpC1" thuộc chuyên ngành gì?
Luận án "Xạ khuẩn Việt Nam: Chiết tách, cấu trúc, tác động protein ClpC1" thuộc chuyên ngành Hóa học. Danh mục: Vi Sinh Vật Học.
Luận án "Xạ khuẩn Việt Nam: Chiết tách, cấu trúc, tác động protein ClpC1" có bao nhiêu trang?
Luận án "Xạ khuẩn Việt Nam: Chiết tách, cấu trúc, tác động protein ClpC1" có 133 trang. Bạn có thể xem trước một phần tài liệu ngay trên trang web trước khi tải về.
Cách tải luận án "Xạ khuẩn Việt Nam: Chiết tách, cấu trúc, tác động protein ClpC1" về máy như thế nào?
Để tải luận án về máy, bạn nhấn nút "Tải xuống ngay" trên trang này, sau đó hoàn tất thanh toán phí lưu trữ. File sẽ được tải xuống ngay sau khi thanh toán thành công. Hỗ trợ qua Zalo: 0559 297 239.