Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thuringiensis phục vụ tạ
Luận án tiến sĩ: Nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn Bacillus thuringiensis. Khám phá chủng hiệu quả, ứng dụng kiểm soát côn trùng hại nông nghiệp.
Luan An
Luận án tiến sĩ
Năm xuất bản
Số trang
177
Thời gian đọc
27 phút
Lượt xem
0
Lượt tải
0
Phí lưu trữ
50 Point
Tổng quan nhanh
- Chủ đề:
- 1. Tối ưu hóa Bacillus thuringiensis kiểm soát côn trùng
- Số trang:
- 177 trang
- Trường:
- Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam
- Chuyên ngành:
- Công nghệ sinh học
- Tác giả:
- Phạm Thùy Dương
- Năm:
- 2019
Tóm tắt nội dung luận án
I. Tối ưu hóa Bacillus thuringiensis kiểm soát côn trùng
Vi khuẩn Bacillus thuringiensis (Bt) đại diện cho giải pháp hiệu quả trong kiểm soát côn trùng. Đây là một tác nhân sinh học có khả năng diệt trừ sâu bệnh. Luận án này tập trung vào tuyển chọn các chủng Bt đặc hiệu. Mục tiêu là phát triển thuốc trừ sâu sinh học an toàn. Công nghệ sinh học đóng vai trò trung tâm trong nghiên cứu này. Thuốc trừ sâu sinh học từ Bt giảm thiểu tác động tiêu cực môi trường. Nó góp phần vào nền nông nghiệp bền vững. Việc nghiên cứu sâu về Bt mở ra nhiều triển vọng mới. Các chủng Bt tiềm năng được xác định. Hiệu quả diệt côn trùng của chúng được đánh giá kỹ lưỡng. Nhu cầu kiểm soát côn trùng gây hại là cấp thiết. Đặc biệt là các loài thuộc bộ hai cánh (Diptera). Nhiều loài Diptera gây thiệt hại lớn cho cây trồng và sức khỏe con người. Vì vậy, việc tìm kiếm giải pháp mới là quan trọng.
1.1. Tầm quan trọng của Bacillus thuringiensis trong nông nghiệp
Bacillus thuringiensis (Bt) là một loại vi khuẩn đất. Nó sản xuất các protein tinh thể (độc tố Cry) độc với côn trùng. Các protein Cry này là thành phần chính của thuốc trừ sâu sinh học. Thuốc trừ sâu sinh học từ Bt được sử dụng rộng rãi. Nó giúp kiểm soát nhiều loại sâu hại. Ưu điểm nổi bật là tính chọn lọc cao. Bt chỉ gây hại cho một số loài côn trùng mục tiêu. Nó an toàn cho con người, động vật và môi trường. Sự phát triển của vi khuẩn Bt hỗ trợ nông nghiệp bền vững. Nó giảm sự phụ thuộc vào hóa chất tổng hợp. Vi khuẩn Bt cũng ngăn ngừa kháng thuốc.
1.2. Nhu cầu kiểm soát côn trùng Diptera bền vững
Côn trùng bộ hai cánh (Diptera) bao gồm nhiều loài gây hại. Ví dụ như ruồi đục quả, muỗi, bọ chét. Chúng gây thiệt hại mùa màng và truyền bệnh. Kiểm soát côn trùng này là một thách thức lớn. Các phương pháp hóa học truyền thống gây ra nhiều vấn đề. Chúng tạo ra dư lượng độc hại. Chúng cũng ảnh hưởng đến sinh vật không mục tiêu. Nhu cầu về các giải pháp bền vững ngày càng tăng. Thuốc trừ sâu sinh học từ vi khuẩn Bt là một lựa chọn lý tưởng. Nó cung cấp phương pháp kiểm soát hiệu quả. Đồng thời, nó bảo vệ hệ sinh thái nông nghiệp.
1.3. Lợi ích của thuốc trừ sâu sinh học Bt
Thuốc trừ sâu sinh học Bacillus thuringiensis mang lại nhiều lợi ích. Nó có khả năng phân hủy sinh học. Điều này giúp giảm thiểu tồn dư trong môi trường. Nó cũng không gây độc cho động vật có vú và chim. Thuốc trừ sâu Bt giảm rủi ro sức khỏe cho nông dân và người tiêu dùng. Việc sử dụng thuốc trừ sâu sinh học Bt phù hợp với canh tác hữu cơ. Nó thúc đẩy đa dạng sinh học trong nông trại. Các protein Cry trong Bt có cơ chế tác động đặc hiệu. Điều này làm chậm sự phát triển của tính kháng thuốc. Thuốc trừ sâu sinh học Bt là công cụ quan trọng. Nó hỗ trợ một hệ thống nông nghiệp an toàn hơn.
II. Phương pháp phân lập và sàng lọc vi khuẩn Bt hiệu quả
Quá trình phân lập vi khuẩn Bacillus thuringiensis từ môi trường là bước đầu tiên. Sau đó là sàng lọc các chủng có hoạt tính diệt côn trùng cao. Đây là nền tảng cho việc phát triển thuốc trừ sâu sinh học mới. Các phương pháp nghiên cứu được áp dụng nghiêm ngặt. Điều này nhằm đảm bảo lựa chọn được chủng vi khuẩn Bt tối ưu. Các chủng được thu thập từ nhiều nguồn mẫu đất khác nhau. Mỗi mẫu được xử lý và cấy truyền trong phòng thí nghiệm. Kỹ thuật nuôi cấy chuyên biệt được sử dụng. Mục đích là để kích thích sự phát triển của Bacillus thuringiensis. Các chủng Bt sau đó được đánh giá khả năng sản xuất độc tố Cry. Hoạt tính sinh học của chúng được kiểm tra. Việc này tập trung vào côn trùng bộ hai cánh. Mục tiêu là tìm ra các chủng có tiềm năng thương mại.
2.1. Quy trình phân lập chủng Bacillus thuringiensis
Phân lập vi khuẩn Bacillus thuringiensis bắt đầu từ mẫu đất. Mẫu đất được thu thập từ các vùng nông nghiệp khác nhau. Quy trình bao gồm xử lý nhiệt để loại bỏ các vi sinh vật không phải là bào tử. Sau đó, mẫu được cấy trên môi trường chọn lọc. Các khuẩn lạc Bacillus thuringiensis được nhận diện dựa trên đặc điểm hình thái. Tiếp theo, các khuẩn lạc này được làm sạch. Chúng được nuôi cấy trong môi trường lỏng. Bước này tạo ra số lượng vi khuẩn đủ lớn cho các thí nghiệm tiếp theo. Các chủng phân lập được lưu giữ cẩn thận. Mục đích là để bảo toàn nguồn gen quý giá. Mỗi chủng được gán một mã số riêng. Điều này giúp dễ dàng theo dõi và quản lý.
2.2. Kỹ thuật sàng lọc chủng Bt có hoạt tính cao
Sau khi phân lập, các chủng Bacillus thuringiensis được sàng lọc. Sàng lọc dựa trên khả năng sản xuất protein Cry. Các chủng được nuôi cấy để tạo ra bào tử và tinh thể độc tố. Sau đó, tinh thể độc tố Cry được tách chiết. Hoạt tính sinh học của chúng được kiểm tra trên ấu trùng côn trùng. Cụ thể là ấu trùng của các loài thuộc bộ hai cánh (Diptera). Liều gây chết 50% (LD50) được xác định. Các chủng có LD50 thấp nhất được coi là tiềm năng. Chúng có hoạt tính diệt côn trùng cao. Phương pháp này giúp nhanh chóng xác định các ứng cử viên tốt nhất. Nó tiết kiệm thời gian và nguồn lực nghiên cứu.
2.3. Đặc trưng hóa sinh học và phân tử các chủng tiềm năng
Các chủng Bacillus thuringiensis tiềm năng được đặc trưng hóa sâu hơn. Đặc trưng hóa sinh học bao gồm phân tích các đặc điểm hình thái và sinh lý. Ví dụ như khả năng sinh tổng hợp các chất trao đổi. Đặc trưng hóa phân tử bao gồm phân tích gen. Cụ thể là xác định sự hiện diện của các gen mã hóa độc tố Cry. Các gen như cry2A là mục tiêu chính. Kỹ thuật PCR được sử dụng để phát hiện các gen này. Phân tích trình tự gen cung cấp thông tin chi tiết. Nó giúp xác định loại protein Cry mà chủng đó sản xuất. Việc này khẳng định tính đặc hiệu của chủng. Nó cũng giúp phân loại dưới loài của Bacillus thuringiensis. Đặc trưng hóa đầy đủ là cần thiết. Nó giúp hiểu rõ cơ chế tác động và tiềm năng ứng dụng.
III. Khám phá độc tố Cry từ chủng Bacillus thuringiensis mới
Nghiên cứu sâu về độc tố Cry là trọng tâm của luận án. Các protein Cry này là yếu tố chính quyết định khả năng diệt côn trùng của Bacillus thuringiensis. Việc khám phá các độc tố Cry mới hoặc biến thể của chúng có ý nghĩa lớn. Nó mở ra cơ hội phát triển các thuốc trừ sâu sinh học hiệu quả hơn. Đặc biệt là chống lại các loài côn trùng bộ hai cánh đã kháng thuốc. Phân tích gen độc tố Cry được thực hiện chi tiết. Mục đích là để xác định loại protein Cry mà mỗi chủng vi khuẩn Bt sản xuất. Sau đó, các protein này được tinh sạch và đặc trưng. Cơ chế tác động của chúng trên côn trùng mục tiêu được nghiên cứu. Việc này cung cấp hiểu biết sâu sắc về sinh lý học của độc tố. Nó cũng hỗ trợ việc tối ưu hóa hiệu quả diệt côn trùng.
3.1. Xác định sự hiện diện của gen độc tố Cry
Sự có mặt của gen độc tố Cry là yếu tố then chốt. Gen này mã hóa protein gây độc cho côn trùng. Kỹ thuật sinh học phân tử được áp dụng để xác định gen cry2A và các gen Cry khác. PCR (Polymerase Chain Reaction) là công cụ chính. Các cặp mồi đặc hiệu được thiết kế. Chúng giúp khuếch đại các đoạn gen Cry. Điện di gel xác nhận sự hiện diện của các sản phẩm PCR. Các chủng Bacillus thuringiensis được phân tích. Mục đích là để tìm các gen độc tố Cry đa dạng. Sự đa dạng này có thể dẫn đến phổ hoạt động rộng hơn. Nó cũng tăng cường hiệu quả chống lại các loài côn trùng khác nhau.
3.2. Nghiên cứu protein Cry và cơ chế tác động
Protein Cry là thành phần hoạt tính của vi khuẩn Bt. Chúng được sản xuất dưới dạng tinh thể trong quá trình bào tử hóa. Khi côn trùng ăn phải, protein Cry được hòa tan trong ruột. Môi trường kiềm trong ruột côn trùng giúp hoạt hóa độc tố. Protein được cắt thành dạng hoạt động. Sau đó, nó gắn vào các thụ thể đặc hiệu trên tế bào ruột. Việc này tạo ra lỗ thủng trên màng tế bào. Dẫn đến sự phá vỡ cân bằng ion và tế bào bị ly giải. Cuối cùng, côn trùng bị chết. Nghiên cứu tập trung vào phân tích cấu trúc và chức năng của protein Cry. Điều này giúp hiểu rõ hơn về cơ chế tác động này. Từ đó, có thể điều chỉnh để tăng cường hiệu quả.
3.3. Đánh giá hoạt tính diệt côn trùng của độc tố Cry
Hoạt tính diệt côn trùng của độc tố Cry được đánh giá kỹ lưỡng. Thí nghiệm sinh học được tiến hành trên ấu trùng côn trùng bộ hai cánh. Các nồng độ độc tố Cry khác nhau được thử nghiệm. Tỷ lệ gây chết và thời gian gây chết được ghi nhận. Việc này giúp xác định liều lượng tối ưu. Nó cũng giúp đánh giá hiệu quả của từng loại protein Cry. So sánh hoạt tính giữa các chủng Bt khác nhau là cần thiết. Mục tiêu là tìm ra chủng có độc tố Cry mạnh nhất. Các kết quả này cung cấp bằng chứng khoa học vững chắc. Chúng hỗ trợ cho việc lựa chọn chủng để sản xuất thuốc trừ sâu sinh học.
IV. Phát triển thuốc trừ sâu sinh học Bacillus thuringiensis
Luận án này tập trung vào việc chuyển đổi nghiên cứu cơ bản thành ứng dụng thực tiễn. Phát triển thuốc trừ sâu sinh học từ các chủng Bacillus thuringiensis đã tuyển chọn là mục tiêu chính. Quá trình này bao gồm tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy. Mục đích là để đạt được sản lượng cao của bào tử và độc tố Cry. Sau đó là xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm diệt côn trùng. Chế phẩm này phải đảm bảo hiệu quả ổn định. Nó cũng cần an toàn cho môi trường. Việc này giúp cung cấp một giải pháp kiểm soát côn trùng bền vững. Đặc biệt cho các loài Diptera gây hại. Nghiên cứu này góp phần vào việc mở rộng thị trường thuốc trừ sâu sinh học. Nó cũng thúc đẩy việc sử dụng các sản phẩm thân thiện môi trường.
4.1. Quy trình tạo chế phẩm diệt côn trùng từ Bt
Quy trình tạo chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học bao gồm nhiều bước. Đầu tiên, chủng Bacillus thuringiensis đã tuyển chọn được nuôi cấy. Quá trình lên men được thực hiện trong môi trường tối ưu. Mục đích là để sản xuất lượng lớn bào tử và tinh thể độc tố Cry. Sau đó, dịch nuôi cấy được thu hoạch. Các bào tử và tinh thể được tách chiết và cô đặc. Các chất phụ gia an toàn được thêm vào. Điều này giúp tăng cường độ bền và hiệu quả của chế phẩm. Cuối cùng, sản phẩm được đóng gói. Quy trình này phải đảm bảo chất lượng và hoạt tính sinh học của thuốc trừ sâu Bt.
4.2. Tối ưu hóa môi trường lên men sản xuất Bt
Để sản xuất thuốc trừ sâu sinh học hiệu quả, môi trường lên men là rất quan trọng. Nghiên cứu này tối ưu hóa các yếu tố dinh dưỡng. Ví dụ như nguồn carbon, nitơ, và các khoáng chất vi lượng. Nhiệt độ, pH và thời gian lên men cũng được điều chỉnh. Mục đích là để tăng cường sinh khối vi khuẩn Bt. Đồng thời, nó cũng tối đa hóa sản lượng độc tố Cry. Phương pháp đáp ứng bề mặt (Response Surface Methodology) được áp dụng. Điều này giúp tìm ra các điều kiện tối ưu. Việc tối ưu hóa giúp giảm chi phí sản xuất. Nó cũng cải thiện hiệu quả tổng thể của quá trình.
4.3. Hiệu quả của chế phẩm Bt trên côn trùng gây hại
Chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học từ Bacillus thuringiensis được thử nghiệm. Hiệu quả của nó được đánh giá trên côn trùng bộ hai cánh gây hại. Các thí nghiệm được thực hiện trong điều kiện phòng thí nghiệm. Sau đó là ở các điều kiện bán tự nhiên. Tỷ lệ tử vong và mức độ thiệt hại của cây trồng được quan sát. Các kết quả cho thấy hiệu quả diệt côn trùng cao. Chế phẩm Bt có khả năng kiểm soát đáng kể các loài gây hại. Nó cung cấp một giải pháp thay thế hiệu quả. Điều này giảm sự phụ thuộc vào thuốc trừ sâu hóa học. Nghiên cứu này khẳng định tiềm năng ứng dụng của chế phẩm Bt.
V. Ứng dụng nông nghiệp bền vững của vi khuẩn Bt tiềm năng
Luận án này không chỉ dừng lại ở nghiên cứu khoa học. Nó còn mở rộng tầm nhìn về ứng dụng thực tiễn của vi khuẩn Bacillus thuringiensis. Các chủng Bt tiềm năng có thể đóng góp vào nền nông nghiệp bền vững. Việc sử dụng thuốc trừ sâu sinh học Bt giúp giảm thiểu tác động môi trường. Nó bảo vệ đa dạng sinh học và sức khỏe con người. Nghiên cứu này cung cấp cơ sở để phát triển các sản phẩm mới. Các sản phẩm này có thể tích hợp vào các chiến lược quản lý dịch hại tổng hợp (IPM). Nó là một phần của hệ thống nông nghiệp xanh hơn. Vi khuẩn Bt đại diện cho một giải pháp tiên tiến. Nó là giải pháp an toàn trong kiểm soát côn trùng. Điều này đặc biệt quan trọng trong bối cảnh biến đổi khí hậu.
5.1. Vai trò của vi khuẩn Bt trong kiểm soát dịch hại
Bacillus thuringiensis đóng vai trò trung tâm trong kiểm soát dịch hại sinh học. Nó là một tác nhân an toàn và hiệu quả. Vi khuẩn Bt sản xuất protein Cry độc đáo. Protein này chỉ tác động lên các loài côn trùng cụ thể. Điều này giúp bảo vệ các loài thiên địch và côn trùng có ích. Việc sử dụng vi khuẩn Bt giảm thiểu áp lực chọn lọc kháng thuốc. Nó cũng giảm sự phụ thuộc vào hóa chất. Vi khuẩn Bt tích hợp tốt vào các chương trình IPM. Nó hỗ trợ một hệ thống quản lý dịch hại cân bằng.
5.2. Hướng tới nông nghiệp xanh với thuốc trừ sâu sinh học
Nông nghiệp xanh là xu hướng toàn cầu. Nó tập trung vào bảo vệ môi trường và sản xuất an toàn. Thuốc trừ sâu sinh học từ Bacillus thuringiensis phù hợp hoàn hảo với triết lý này. Nó không để lại dư lượng độc hại trên nông sản. Nó cũng không gây ô nhiễm đất và nước. Việc áp dụng thuốc trừ sâu Bt giúp tăng cường an toàn thực phẩm. Nó cũng bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng. Nông dân có thể canh tác bền vững hơn. Điều này giúp họ đạt được năng suất cao mà vẫn bảo vệ môi trường.
5.3. Tiềm năng mở rộng ứng dụng vi khuẩn Bt
Tiềm năng của vi khuẩn Bacillus thuringiensis rất lớn. Nó không chỉ giới hạn ở kiểm soát côn trùng bộ hai cánh. Các chủng Bt mới có thể được tuyển chọn. Chúng có thể có phổ hoạt động rộng hơn. Nghiên cứu tiếp theo có thể khám phá các protein Cry mới. Các protein này có thể nhắm mục tiêu vào các loài sâu hại khác. Công nghệ gen có thể cải thiện hiệu quả của Bt. Nó có thể tăng cường khả năng chống chịu của chủng. Việc phát triển các chế phẩm Bt đa dạng là cần thiết. Điều này giúp đáp ứng nhu cầu đa dạng của nông nghiệp hiện đại. Nó mở rộng ứng dụng của vi khuẩn Bt toàn cầu.
Tải xuống file đầy đủ để xem toàn bộ nội dung
Tải đầy đủ (177 trang)Trích đoạn nội dung luận án
Tải xuống để đọc toàn bộBỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ----***---- Phạm Thùy Dương NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN VI KHUẨN BACILLUS THURINGIENSIS PHỤC VỤ TẠO CHẾ PHẨM DIỆT CÔN TRÙNG BỘ HAI CÁNH (DIPTERA) CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 9.01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Hà Nội, tháng 3 năm 2019 DỰ THẢO LUẬN ÁN TIẾN SĨ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ----***---- Phạm Thùy Dương NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN VI KHUẨN BACILLUS THURINGIENSISPHỤC VỤ TẠO CHẾ PHẨM DIỆT CÔN TRÙNG BỘ HAI CÁNH (DIPTERA) CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 9.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC 1. Ngô Đình Bính 2. Lê Đức Khánh Hà Nội, tháng 3 năm 2019 DỰ THẢO LUẬN ÁN TIẾN SĨ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN TrTrƣớc tiên, cho phép tôi đƣợc bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới PGS. Ngô Đình Bính giáo viên hƣớng dẫn khoa học, ngƣời đã tạo điều kiện và cấp kinh phí cho tôi thực hiện luận án, đồng thời luôn ở bên truyền dạy kiến thức kinh nghiệm và động viên tôi trong suốt quá trình thực hiện luận án.
Tôi xin trân trọng cám ơn TS Lê Đức Khánh, ngƣời hƣớng dẫn khoa học, đã giúp tôi hiểu sâu sắc hơn về lĩnh vực khoa học thực hiện trong luận án và cấp kinh phí cho tôi thực hiện luận án. Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán bộ Trung tâm Giống và Bảo tồn nguồn gen vi sinh vật, Viện Công nghệ sinh học đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi thực hiện phần lớn các thí nghiệm trong phạm vi luận án. Tôi xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Tăng Thị Chính và tập thể cán bộ phòng Vi sinh môi trƣờng-Viện Công nghệ Môi trƣờng đã tạo điều kiện cho tôi đƣợc sử dụng một số thiết bị và tận tình giúp đỡ, động viên tôi trong suốt quá trình thực hiện luận án. Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo Trƣờng Đại học dân lập Phƣơng Đông, Khoa Công nghệ Sinh học và Môi trƣờng đã luôn động viên và tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp tôi hoàn thành luận án.
Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến các thầy giáo, cô giáo, các nhà khoa học, các đồng nghiệp, bạn bè trong và ngoài trƣờng Đại học Phƣơng Đông,Viện Công nghệ sinh học đã luôn quan tâm, động viên và chỉ dẫn cho tôi để tôi hoàn thành luận án. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới hai bên gia đình nội ngoại đã luôn là chỗ dựa vững chắc cho tôi trong suốt quá trình thực hiện luận án. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn chồng và các con của tôi đã cho tôi thêm sức mạnh, động lực để tôi vƣợt qua mọi khó khăn. i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Đây là công trình nghiên cứu do chính tôi thực hiện và một số kết quả cùng cộng sự khác.
Các số liệu và kết quả trình bày trong luận án là trung thực, một phần đã đƣợc công bố trên các tạp chí chuyên ngành với sự đồng ý và cho phép của tác giả. Phần còn lại chƣa đƣợc ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác Hà Nội, ngày thángnăm 2018 Tác giả ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN .ii MỤC LỤC. iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT. vi DANH MỤC BẢNG.
viii DANH MỤC HÌNH. Mục tiêu nghiên cứu. Mục tiêu chung. Mục tiêu cụ thể.
Nội dung nghiên cứu. Những đóng góp mới của luận án. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài. Ý nghĩa khoa học.
Ý nghĩa thực tiễn. 4 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU. Vi khuẩn Bacillus thuringiensis. Lịch sử nghiên cứu và ứng dụng của Bacillus thuringiensis.
Vị trí, đặc điểm hình thái và sinh thái học Bacillus thuringiensis. Đặc điểm phân loại. Hệ gen của vi khuẩn Bacillus thuringiensis. Đặc điểm protein độc tố diệt côn trùng.
Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh trƣởng và sinh tổng hợp độc tố của vi khuẩn B. Nhu cầu dinh dƣỡng của Bacillus thuringiensis. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng vi khuẩn B. thuringiensis ở Việt Nam 26 1.
Hệ biểu hiện Escherichia coli. Côn trùng thử nghiệm. 31 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Thuốc trừ sâu sinh học Bacillus thuringiensis.
Tình hình nghiên cứu sản xuất thuốc trừ sâu sinh học BT. Công nghệ sản xuất thuốc trừ sâu sinh học B. Ảnh hƣởng của thuốc trừ sâu sinh học BT đến môi trƣờng và con ngƣời40 1. Tồn dƣ của thuốc trừ sâu BT.
44 CHƢƠNG II. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .Vật liệu, dụng cụ và thiết bị nghiên cứu. Chủng vi sinh vật. Cặp mồi khuếch đại gen cry2A và hệ vector.
Môi trƣờng nuôi cấy. Địa điểm và thời gian thực hiện thí nghiệm. Phƣơng pháp nghiên cứu. Phƣơng pháp vi sinh.
Phƣơng pháp thử hoạt tính sinh học. Phƣơng pháp sinh học phân tử. Tối ƣu hóa môi trƣờng lên men theo phƣơng pháp đáp ứng bề mặt. 64 CHƢƠNG III.
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN. Phân lập và lựa chọn chủng hiệu lực kháng côn trùng bộ hai cánh từ các chủng Bacillus thuringiensis. Phân lập các chủng Bacillus. Nghiên cứu protein tinh thể.
Phân loại dƣới loài các chủng Bacillus thuringiensis phân lập…………. Đánh giá khả năng diệt côn trùng bộ hai cánh của các chủng phân lập. 73 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Khẳng định sự có mặt của cry2A liên quan tới tính trạng diệt côn trùng bộ hai cánh ở các chủng phân lập.
Phát hiện gen cry2A từ các chủng Bacillus thuringiensis đã phân loại huyết thanh bằng phƣơng pháp PCR. Tách dòng và đọc trình tự gen cry2A. Biểu hiện gen. Nghiên cứu tối ƣu điều kiện biểu hiện gen.
Tinh chế protein tái tổ hợp bằng cột sắc kí ái lực Probond Nikel Resin. Hoạt tính diệt côn trùng bộ hai cánh của rCry2A và chủng MSS8. Lựa chọn môi trƣờng và tối ƣu lên men làm tăng khả năng hình thành protein tinh thể của chủng vi khuẩn MSS8. Xử lý bã bia làm nguyên liệu nuôi cấy vi khuẩn MSS8.
Đánh giá tác động độc lập của các yếu tố dinh dƣỡng bổ sung vào dịch thủy phân bã bia đến sinh trƣởng và sinh tinh thể độc của vi khuẩn MSS8. Tối ƣu hóa môi trƣờng lên men cho vi khuẩn MSS8.4 từ nguồn bã bia. Nghiên cứu tạo chế phẩm. Ảnh hƣởng của điều kiện lên men đến sinh trƣởng,hình thành bào tử và sinh tinh thể độc của chủng MSS8.
Kết quả thử nghiệm chế phẩm BT với ấu trùng ruồi nhà. 119 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ. 126 DANH MỤC CÁC BÀI BÁO ĐƢỢC CÔNG BỐ. 128 LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN.
128 TÀI LIỆU THAM KHẢO. 129 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ 1 Bp Base pair 2 BSA Bovine serum albumin-albumin huyết thanh bò 3 Bt Bacillus thuringiensis 4 BT Chế phẩm Bacillus thuringiensis 5 Btk Bacillus thuringiensis serova kurstaki 6 CFU Colony Forming Unit 7 dH2O Deionized water 8 DNA Deoxyribonucleotide acid 9 dNTPs Deoxynucleotide triphosphates 10 ĐC Đối chứng 11 E. coli Escherichiacoli 12 EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid 13 EtBr Ethidium Bromide 14 kDa Kilo Dalton 15 Kb Kilo base 16 LB Luria-Bertani- Môi trƣờng nuôi cấy vi khuẩn 17 SDS Sodium dodecyl sulphate SDS- Điện di trên gel polyacrylamide có chứa sodium 18 PAGE doecyl sunfat 19 Sol Solution- Dung dịch 20 IPTG Isopropyl- β-D-thiogalactoside- Chất cảm ứng 21 TE Tris EDTA 22 X-gal 5- bromo- 4 Cloro- 3 indolyl β- d galactoside 23 MTCS Môi trƣờng cơ sở 24 OD Optical density-Mật độ quang học 25 TCC Tổng tế bào đếm đƣợc (gồm tế bào và bào tử sống) vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 26 SC Số bào tử đếm đƣợc 27 TS Tổng chất rắn 28 DTPBB Dịch thủy phân bã bia vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1. Phân tích trình tự của độc tố cry đại diện với cấu trúc đƣợc nghiên cứu bằng tinh thể tia X.
Thành phần một số môi trƣờng lên men sản xuất chế phẩm BT. Thành phần bã malt (%). Thành phần trung bình của tro. Thành phần các môi trƣờng nuôi cấy.
Thành phần và nồng độ các loại dung dịch. Các thí nghiệm đƣợc thiết kế bởi phần mềm design expert 10. Kết quả phân loại dƣới loài các chủng B. thuringiensis bằng phƣơng pháp huyết thanh.
Kết quả thử hoạt tính diệt ấu trùng bộ 2 cánh của các chủng B. Thử hoạt tính sinh học của rcry2a và protein tinh thể từ B. thuringiensis với ấu trùng M. Hoạt tính diệt côn trùng của protein tinh thể từ chủng MSS8.4 và protein tái tổ hợp RCry2A .Ảnh Hƣởng Của Phƣơng Pháp Xử Lý Đến Khả Năng Sinh Trƣởngvà Sinh Tổng Hợp Protein Tinh Thể Của MSS8.Thành Phần Hóa Học Của Dịch Thủy Phân Bã Bia.
Ảnh hƣởng của tỷ lệ bã bia đến sinh trƣởng, sinh protein tinh thể của chủng vi khuẩn MSS8. Ảnh hƣởng của nguồn dinh dƣỡng hữu cơ bổ sung vào dịch thủy phân bã bia đến sinh trƣởng và sinh tổng hợp protein tinh thể. Ảnh hƣởng của nguồn khoáng bổ sung vào dịch thủy phân bã bia đến sinh trƣởng và sinh tổng hợp protein tinh thể. 101 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.
Ảnh hƣởng của nồng độ bột đậu tƣơng bổ sung vào dịch thủy phân bã bia đến sinh trƣởng của MSS8. Kết quả phân tích hồi quy nồng độ protein tinh thể. Hàm lƣợng protein tinh thể tính theo mô hình và thực nghiệm. Ảnh hƣởng của ph ban đầu đến sinh trƣởng và sinh tổng hợp delta endotoxin của vi khuẩn MSS 8.
Giá trị ph ban đầu và sau 48 giờ lên men. Ảnh hƣởng của nhiệt độ đến sinh trƣởng và sinh tổng hợp protein tinh thể của vi khuẩn MSS8. Kết quả thử hoạt tính diệt ấu trùng ruồi nhà Musca domestica của chế phẩm. Hoạt tính diệt ấu trùng ruồi của chế phẩm BT qui mô pilot.
Các công thức chế phẩm bt diệt ruồi cho thử nghiệm ngoài thực địa. Hiệu quả diệt dòi của chế phẩm bt dạng bột thấm ƣớt. 124 ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1. Hình ảnh bào tử và tinh thể của vi khuẩn B.
Cấu trúc tinh thể của Cry1Aa, cry2aa (. Cấu trúc tinh thể của colicin N. Tóm tắt phổ hoạt tính của B. Cơ chế tác động của protein tinh thể độc lên côn trùng.
Vòng đời của ruồi nhà (musca domestica). Trứng của ruồi nhà (musca domestica). Các giai đoạn phát triển của muỗi .
Nội dung được bảo vệ bản quyền — Tải xuống đầy đủ
Trích dẫn luận án này
Phạm Thùy Dương (2019). Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thur [Luận án tiến sĩ, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam]. LuanAn.net. https://luanan.net/sinh-hoc/vi-sinh-vat-hoc/diptera
Câu hỏi thường gặp
Luận án "Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thur" nghiên cứu về vấn đề gì?
Luận án tiến sĩ: Nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn Bacillus thuringiensis. Khám phá chủng hiệu quả, ứng dụng kiểm soát côn trùng hại nông nghiệp.
Luận án "Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thur" được bảo vệ tại trường nào?
Luận án này được bảo vệ tại Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam. Năm bảo vệ: 2019.
Luận án "Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thur" thuộc chuyên ngành gì?
Luận án "Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thur" thuộc chuyên ngành Công nghệ sinh học. Danh mục: Vi Sinh Vật Học.
Luận án "Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thur" có bao nhiêu trang?
Luận án "Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thur" có 177 trang. Bạn có thể xem trước một phần tài liệu ngay trên trang web trước khi tải về.
Cách tải luận án "Luận án tiến sĩ nghiên cứu tuyển chọn vi khuẩn bacillus thur" về máy như thế nào?
Để tải luận án về máy, bạn nhấn nút "Tải xuống ngay" trên trang này, sau đó hoàn tất thanh toán phí lưu trữ. File sẽ được tải xuống ngay sau khi thanh toán thành công. Hỗ trợ qua Zalo: 0559 297 239.