Luận án tiến sĩ nghiên cứu chiết xuất tinh chế và xác định hoạt tính sinh học củ

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ALT: Alanine aminotransferase (GPT: Glutamate pyruvate transaminase) AST: Aspartate aminotransferase (GOT: glutamate oxalate transaminase) BCC: Công ty phân tích thông tin thị trường Massachusetts, Mỹ CNSH: Công nghệ sinh học COX-2: Protein tiền viêm DMSO: Dimethyl Sulfoxide ELISA: Enzyme - linked immunosorbent assay FDA: Food and Drug Administration (Cục Quản lý thực phẩm và dược phẩm Mỹ) HPLC: High performent liquid chromatography (sắc kí lỏng hiệu năng cao) IUPAC: International Union of Pure and Applied Chemistry (Liên hiệp Hóa học Thuần túy và Ứng dụng Quốc tế) KB : Epidermic carcinoma (Ung thư biểu mô) LCMS: Liquid Chromatography Mass Spectrometry (sắc ký lỏng khối phổ) LDL: Low Density Lipoprotein (Lipoprotein tỷ trọng thấp) LNCap: Hormone dependent human prostate carcinoma (Ung thư tuyến tiền liệt) LU: Lung carcinoma (ung thư phổi) MCF: Human breast carcinoma (ung thư vú) NCI: National Cancer Institute (Viện Ung thư Quốc gia Hoa Kỳ) NEI: National Eye Institue (Viện mắt Quốc gia Hoa Kỳ) NMR: Nuclear Magnetic Resonance spectrometry (cộng hưởng từ hạt nhân) nNOS: neuronal Nitric Oxyde Synthetase (enzyme tổng hợp oxit nitric não) OD: Optical density (mật độ quang học) OECD: Organization for Economic Cooperation and Development (Tổ chức hợp tác và Phát triển Kinh tế) PBS Đệm PBS (đệm huyết thanh phôi bò) SDS: Sodium Dodexyl Sulphate SRB: Sulforhodamin B. TCA: Trichlo acetic acid TEMED: Tetramethylethylenediamine TPCN: Thực phẩm chức năng UVA: U violet A (tia cực tím A) UVB: Ultra violet B (tia cực tím B) TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1. Các nhóm chức phổ biến Bảng 1. Một số ví dụ về nhóm chức và các carotenoid chứa chúng Bảng 2.

Các mẫu thực vật sử dụng trong nghiên cứu Bảng 2. Các hệ dung môi sử dụng trong các thí nghiệm tách chiết và tinh sạch carotenoid Bảng 2. Thành phần các loại đệm, dung dịch sử dụng trong các nghiên cứu hoạt tính sinh học Bảng 2. Các thiết bị sử dụng trong nghiên cứu Bảng 3.

Thành phần viên nang thực phẩm chức năng Ocpola TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1. Cấu trúc khung carbon của các carotenoid Hình 1. Cấu trúc chung của các carotenoid hydrocarbon Hình 1. Những tác hại do các gốc tự do gây nên cho cơ thể sống Hình 1.

Các tác dụng sinh học của carotenoid Hình 1.12 Sản lượng các carotenoid trong năm 2004, dự kiến năm 2009 Hình 1. Một số sản phẩm thực phẩm chức năng chứa carotenoid Hình 1.14 Một số sản phẩm TPCN chứa các carotenoid sử dụng ở Việt nam Hình 2.1 Đường chuẩn β-carotene Hình 2.2 Đường chuẩn lycopene Hình 2.3 Đường chuẩn lutein Hình 3. Ảnh hưởng của β-carotene lên hoạt độ catalase máu người Hình 3. Ảnh hưởng của lycopene lên hoạt độ catalase máu người Hình 3.

Ảnh hưởng của lutein lên hoạt độ catalase máu người Hình 3. Ảnh hưởng của -carotene lên hoạt độ peroxidase máu người Hình 3. Ảnh hưởng của lycopene lên hoạt độ peroxidase máu người Hình 3. Ảnh hưởng của lutein lên hoạt độ peroxidase máu người Hình 3.

Sự tăng khối lượng chuột ở các lô thí nghiệm Hình 3. Sự thay đổi hoạt độ catalase trong máu chuột ở các lô thí nghiệm Hình 3. Sự thay đổi hoạt độ catalase trong gan chuột ở các lô thí nghiệm Hình 3. Sự thay đổi hoạt độ peroxidase máu chuột ở các lô thí nghiệm TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.

Sự thay đổi hoạt độ peroxidase gan chuột ở các lô thí nghiệm Hình 3. Hàm lượng cytochrome b5 trong máu và gan ở các lô thí nghiệm Hình 3. Các giá trị GOT, GPT trong máu ở các lô chuột thí nghiệm Hình 3. Các giá trị GOT, GPT trong gan ở các lô chuột thí nghiệm Hình 3.

Hình ảnh quan sát tiêu bản đúc cắt tế bào gan chuột ở 10 lô thí nghiệm Hình 3. Giá trị IC50 các chế phẩm carotenoid và TPCN Ocpola trên dòng tế bào KB và LNCap Hình 3. Nồng độ chế phẩm carotenoid và TPCN Ocpola tại giá trị IC 50 của tế bào ung thư KB và LNCap Hình 3. Hình ảnh tế bào KB, LNCap dưới tác dụng của lycopene ở nồng độ khác nhau Hình 3.

Hoạt độ caspase-3 ở dòng tế bào ung thư phổi dưới tác động của các carotenoid tinh sạch và TPCN Ocpola Hình 3. Hoạt độ caspase-3 ở dòng tế bào ung thư vú dưới tác động của các carotenoid tinh sạch và TPCN Ocpola Hình 3. Sản phẩm TPCN Ocpola TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỤC LỤC MỞ ĐẦU. TỔNG QUAN TÀI LIỆU.

TỔNG QUAN VỀ CAROTENOID. Giới thiệu chung. Cấu trúc hóa học và phân loại các carotenoid. Tính chất vật lý.

Tính chất hóa học. Vai trò của các carotenoid. Vai trò của carotenoid trong thực vật. Chức năng của các carotenoit đối với đời sống động vật và sức khỏe con ngƣời.

Một số carotenoid điển hình. CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THỰC PHẨM CHỨC NĂNG, DƢỢC PHẨM PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG. Khái niệm về thực phẩm chức năng. Vai trò của thực phẩm chức năng trong cuộc sống hiện đại.

NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. Nguyên liệu và đối tượng nghiên cứu. Hóa chất và các thiết bị thí nghiệm. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.

Phương pháp chiết xuất và tinh chế các carotenoid. Nghiên cứu hoạt tính chống oxy hóa của các carotenoid tinh chế. Nghiên cứu hoạt tính sinh học các carotenoid lên các dòng tế bào ung thư in vitro.40 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.4 Nghiên cứu tác dụng sinh học của các carotenoid lên chuột thực nghiệm theo phương pháp của Favari [50]. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.

KẾT QUẢ THU VÀ CHỌN MẪU NGHIÊN CỨU .ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED. Kết quả thu mẫu và khảo sát các mẫu nghiên cứuError! Bookmark not defined. Kết quả nghiên cứu bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao .Error! Bookmark not defined.3 Kết qủa tinh sạch các carotenoid. KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC CAROTENOIT.

Kết quả thử hoạt tính chống oxy hóa trong điều kiện in vitro. Hoạt tính chống oxy hóa của các chế phẩm tinh sạch các carotenoid lên catalase. Hoạt tính chống oxy hóa của các chế phẩm tinh sạch các carotenoid lên peroxidase .3 Kết quả khả năng chống oxy hóa lên tế bào gan chuột in vitro. Hoạt tính chống oxy hoá của  -carotene, lycopene và lutein trong điều kiện in vivo trên chuột.

Sự thay đổi trọng lƣợng trung bình chuột trƣớc và sau thí nghiệm.2 Hoạt tính của catalase trong máu và chuột .3 Hoạt tính của peroxidase trong máu và gan chuột .4 Enzyme cytochrome b5 trong máuvà gan chuột. Các chỉ số GOT và GPT máu và gan chuột. Kết quả làm tiêu bản đúc cắt tế bào gan chuột. Kết quả thử nghiệm các hoạt tính của β-carotene, lycopene và lutein lên các dòng tế bào ung thư.1 Kết quả thử độ độc lên tế bào .Error! Bookmark not defined.2 Kết quả cảm ứng enzyme Caspase 3 của của β-carotene, lycopene và lutein lên LU1 và MCF7.

KẾT QUẢ ỨNG DỤNG VÀO THỰC TẾ .Thực phẩm chức năng TPCN Ocpola. Thực phẩm chức năng Kingpharocula. 91 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI LUẬN ÁN. 92 TÀI LIỆU THAM KHẢO.

Hình ảnh sắc ký bản mỏng các mẫu nghiên cứu PHỤ LỤC 2. Kết quả sắc ký bản mỏng các carotenoid trong các mẫu nghiên cứu PHỤ LỤC 3. Hình ảnh sắc ký hiệu năng cao các mẫu nghiên cứu PHỤ LỤC 4. Kết quả sắc ký lỏng hiệu năng cao các mẫu nghiên cứu PHỤ LỤC 5.

Các bảng số liệu nghiên cứu trong luận án PHỤ LỤC 6. Khối phổ các carotenoid PHỤ LỤC 7. Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân các carotenoid PHỤ LỤC 8. Chứng nhận tiêu chuẩn sản phẩm TPCNOcpola PHỤ LỤC 9.

Chứng nhận tiêu chuẩn sản phẩm Kingpharocula TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com MỞ ĐẦU Các carotenoid là nhóm các chất màu thiên nhiên có nhiều trong cây cỏ, vi sinh vật… tạo các màu sắc khác nhau cho các loại hoa, lá, củ, quả… Trong y học hiện đại, một số carotenoid đã đƣợc sử dụng làm thuốc nhƣ  – carotene, lutein, lycopene, zeaxanthin…; bên cạnh đó các carotenoid còn đƣợc dùng làm mỹ phẩm, bảo vệ da, làm đẹp da nhƣ là lycopene… Carotenoid còn đƣợc dùng rộng rãi làm các phẩm màu thực phẩm. Đặc biệt là các carotenoid đƣợc sử dụng rộng rãi trong ngành sản xuất thức ăn cho chăn nuôi gà, nuôi trồng thủy sản nhƣ tôm, cá hồi… Nguồn nguyên liệu chính sản xuất carotenoid là thực vật và vi sinh vật, một số carotenoid đã đƣợc sản xuất bằng tổng hợp hóa học nhƣ astaxanthin và canthaxanthin. Gần đây, carotenoid đƣợc sử dụng nhiều trong sản xuất thực phẩm chức năng bổ sung dinh dƣỡng bởi chúng có hoạt tính chống oxy hóa mạnh và có tác dụng phòng và hỗ trợ điều trị một số bệnh ung thƣ nhƣ  – carotene,  – carotene,  – carotene, lutein, zeaxanthin, lycopene… Trên thị trƣờng quốc tế,  - carotene đƣợc chiết xuất từ củ cà rốt, dầu cọ đỏ và từ vi tảo Dunaliella salina…; lycopene đƣợc chiết xuất từ quả cà chua; lutein đƣợc chiết xuất từ hoa cúc vạn thọ, zeaxanthin đƣợc chiết từ ngô vàng… Ở nƣớc ta có nguồn nguyên liệu carotenoid rất độc đáo và đặc hiệu là quả gấc chín. Màng đỏ hạt gấc là nguyên liệu giàu  - carotene và lycopene, phần cùi thịt vàng của quả gấc và lá gấc cũng chứa nhiều  - carotene.

Đất nƣớc ta với nhiều loại cây cỏ là nguồn tài nguyên đa dạng phong phú để tìm kiếm thêm các loại carotenoid mới và dùng làm nguyên liệu để sản xuất các carotenoid đang đƣợc sử dụng rộng rãi trên thế giới nhằm cung cấp cho nhu cầu sử dụng làm thuốc, mỹ phẩm, phẩm màu, phụ gia thức ăn của gia cầm, cá, tôm… và còn có nhiều tiềm năng xuất khẩu. Từ đó, chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu chiết xuất, tinh chế và xác định hoạt tính sinh học của một vài carotenoid từ cây cỏ Việt Nam dùng để sản xuất thực phẩm chức năng”. 1 TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Đề tài này không chỉ có ý nghĩa khoa học mà còn có ý nghĩa thực tiễn cho công cuộc bảo vệ và nâng cao sức khỏe cộng đồng. Mục tiêu của đề tài: - Chiết xuất, tinh chế một số carotenoid có trong cây cỏ Việt Nam và xác định bản chất hóa học của một số carotenoid bằng các phƣơng pháp hiện đại nhƣ sắc ký bản mỏng, sắc ký lỏng hiệu năng cao, khối phổ và cộng hƣởng từ.

Qua đó sàng lọc, để tìm các thực vật có chứa hàm lƣợng cao  - carotene, lycopene và lutein. - Nghiên cứu hoạt tính chống oxy hóa của  - carotene, lycopene, lutein, và sản phẩm thực phẩm chức năng TPCN Ocpola trong điều kiện in vitro qua các chỉ số enzyme oxy hóa nhƣ catalase, peroxidase, cytochrome b5, GOT, GPT, và lên tế bào gan chuột.