Nghiên cứu bào chế và đánh giá tác dụng kháng ung thư dạ dày của viên nén nổi chứa Curcumin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ CỦA VIÊN NÉN NỔI CHỨA CURCUMIN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh-Năm 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ CỦA VIÊN NÉN NỔI CHỨA CURCUMIN Chuyên ngành: Công nghệ dược phẩm và bào chế thuốc Mã số: 62720402 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: 1. VĨNH ĐỊNH Thành phố Hồ Chí Minh-Năm 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa được công bố trong bất cứ công trình nghiên cứu nào khác. Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2017 Tác giả ii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan.

ii Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt.iv Danh mục các bảng.vi Danh mục các hình.ix Danh mục các biểu đồ. xi ĐẶT VẤN ĐỀ. TỔNG QUAN TÀI LIỆU. TỔNG QUAN VỀ CURCUMIN.

TỔNG QUAN VỀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH-ĐỘ ỔN ĐỊNH VÀ TUỔI THỌ CỦA THUỐC. TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP ĐIỀU CHẾ HỆ PHÂN TÁN RẮN (HPTR) ĐỂ CẢI THIỆN ĐỘ HÒA TAN CỦA CURCUMIN. TỔNG QUAN VỀ DẠNG THUỐC NỔI TRONG DẠ DÀY. TỔNG QUAN VỀ UNG THƯ DẠ DÀY-CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH TẾ BÀO VÀ MÔ HÌNH GÂY UNG THƯ DẠ DÀY TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG.

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU. XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CURCUMIN TRONG HPTR BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV-Vis VÀ TRONG VIÊN NÉN NỔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC.

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ HPTR CHỨA CURCUMIN CÓ ĐỘ HÒA TAN CAO BẰNG CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ CHẤT MANG KHÁC NHAU. NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN NỔI CHỨA HỆ PHÂN TÁN RẮN CURCUMIN 100 MG. ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ DẠ DÀY CỦA THÀNH PHẦN CÔNG THỨC VIÊN NÉN NỔI CHỨA HPTR CURCUMIN 100 MG TRÊN DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ Ở NGƯỜI (IN VITRO) VÀ TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (IN VIVO). XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CURCUMIN TRONG HPTR BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV-Vis VÀ TRONG VIÊN NÉN NỔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC.

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ HỆ PHÂN TÁN RẮN CHỨA CURCUMIN CÓ ĐỘ HÒA TAN CAO BẰNG CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ CHẤT MANG KHÁC NHAU. NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN NỔI CHỨA HỆ PHÂN TÁN RẮN CURCUMIN 100 MG. ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ DẠ DÀY CỦA THÀNH PHẦN CÔNG THỨC VIÊN NÉN NỔI CHỨA HPTR CURCUMIN 100 MG TRÊN DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ Ở NGƯỜI (IN VITRO) VÀ TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (IN VIVO).127 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 4 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Stt Chữ Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt viết tắt 1 5-FU 5-fluorouracil 2 ACN Acetonitril 3 ASEAN Association of Southeast Asian Hiệp hội các quốc gia Nations Đông Nam Á 4 B(a)P Benzo(a)pyren 5 CD Cyclodextrin 6 Cur Curcumin 7 DAD Diode array detector Đầu dò dãy diod quang 8 DM Phương pháp dung môi 9 DMBA 7,12 dimethyl benzanthracene 10 DMSO Dimethyl sulfoxide 11 DSC Differential Thermal Analysis Phân tích nhiệt vi sai 12 HPLC High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu năng cao chromatography 13 HPMC Hydropropyl methylcellulose 14 HPTR Hệ phân tán rắn 15 IC50 The half maximal inhibitory Nồng độ tối thiểu ức chế concentration 50% sinh vật thử nghiệm 16 ICH International Conference on Hội nghị quốc tế về hài Harmonization hòa 17 IR Infrared Hồng ngoại 18 MeOH Methanol 19 mtb Khối lượng trung bình 20 MTT 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5- diphenyl tetrazolium bromid) 21 N Phương pháp nghiền 5 Stt Chữ Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt viết tắt 22 PEG Polyethylenglycol 23 PVP Polyvinylpyrrolidon 24 RH Relative humidity Độ ẩm tương đối 25 RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối 26 SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn 27 SEM Scanning Electron Microscopy Kính hiển vi điện tử quét 28 UTDD Ung thư dạ dày 29 UV-Vis Ultraviolet-Visible Tử ngoại khả kiến 30 VL Phương pháp vật lý 31 VNN Viên nén nổi 6 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1. Một số chế phẩm thuôc nổi trên thị trường.

Phân loại mô bệnh học ung thư dạ dày theo Tổ chức Y tế Thế giới năm 2010. Một số nghiên cứu tác dụng của curcumin trên mô hình gây ung thư khác trên chuột. Các nguyên liệu sử dụng trong bào chế. Các nguyên liệu sử dụng trong phân tích.

Các nguyên liệu và động vật sử dụng trong thử in vitro và in vivo. Các trang thiết bị được sử dụng trong đề tài. Các điều kiện thăm dò. Các công thức bào chế HPTR và hỗn hợp trộn vật lý.

Thành phần công thức cơ bản của viên placebo. Thành phần công thức thăm dò các tá dược tạo khung. Điều kiện và tần số thử nghiệm trong nghiên cứu độ ổn định. Các chỉ tiêu đánh giá, mức chất lượng và số lượng viên nén nổi curcumin 100 mg dùng trong nghiên cứu độ ổn định.

Nồng độ thử nghiệm. Sai lệch độ hấp thu của các hệ tá dược so với mẫu giả định. Sự tuyến tính giữa độ hấp thu theo nồng định lượng. Kết quả khảo sát độ chính xác của phương pháp định lượng HPTR curcumin với hệ chất mang PVP K30+Tween 80.

Kết quả thử độ đúng phương pháp định lượng HPTR curcumin. Giá trị trung bình các thông số sắc ký của mẫu chuẩn curcumin ở các pha động khảo sát (n=6). Tính tương thích hệ thống trên mẫu chuẩn curcumin. Tính tương thích hệ thống trên mẫu thử viên nén nổi chứa HPTR curcumin.

Kết quả khảo sát tính tuyến tính. Kết quả khảo sát độ đúng. Khảo sát độ lặp lại của phương pháp. Kết quả khảo sát độ chính xác trung gian.

Độ hoà tan của curcumin nguyên liệu. Độ hoà tan của HPTR curcumin với hệ β-CD và Tween 80. Độ hoà tan của HPTR curcumin với hệ β-CD và PVP K30. Độ hoà tan của HPTR curcumin với hệ PEG 6000/PVP K30 (10:90).

Độ hoà tan của HPTR curcumin với hệ PEG 6000/PVP K30 (25:75). Độ hoà tan của HPTR curcumin với hệ PEG 6000/HPMC 606 (15:85). Độ hoà tan của HPTR curcumin với hệ PVP K30 và Tween 80. Độ hoà tan của curcumin từ các HPTR với các hệ chất mang.

So sánh độ hoà tan giữa các cặp. Độ lặp lại quá trình hoà tan của HPTR curcumin với hệ chất mang PVP K30 và Tween 80 bào chế bằng phương pháp nghiền ướt-công thức 1. Kết quả khảo sát hàm lượng tá dược dính. Kết quả khảo sát tỉ lệ dung môi xát hạt.

Kết quả ảnh hưởng của loại tá dược tạo khí đến khả năng nổi của viên. Kết quả đánh giá khả năng nổi của viên khi thay đổi tỉ lệ NaHCO3 và acid citric. Kết quả đánh giá sử dụng gôm xanthan đến khả năng nổi của viên. Kết quả đánh giá sử dụng HPMC K4M đến khả năng nổi của viên.

Kết quả đánh giá sử dụng HPMC K15M đến khả năng nổi của viên. Kết quả đánh giá sử dụng HPMC 615 đến khả năng nổi của viên. Kết quả đánh giá khả năng nổi của viên khi phối hợp polyme. Kết quả ảnh hưởng của độ cứng đến khả năng nổi của viên.

Mô hình công thức được xây dựng bởi phần mềm Design-Expert. Kết quả thực nghiệm. Thành phần công thức tối ưu. Kết quả thực nghiệm 3 lô kiểm chứng và kết quả dự đoán.

Độ hòa tan từ viên nén nổi chứa HPTR curcumin:PVP:Tween (1:4: 0,22) và viên nén nổi chứa curcumin nguyên liệu. Kết quả kiểm nghiệm 03 lô. Kết quả thử nghiệm độ ổn định của 3 lô ở điều kiện lão hóa cấp tốc tại thời điểm 6 tháng. Kết quả thử nghiệm độ ổn định của 3 lô ở điều kiện thử nghiệm dài hạn tại thời điểm 24 tháng.

Tác dụng của các mẫu thử lên tỷ lệ sống của tế bào ung thư dạ dày N87. Tỷ lệ % ức chế phát triển tế bào ung thư của các mẫu thử. Phương trình hồi quy và giá trị IC50 của các mẫu thử. Số chuột chết ở các lô thử nghiệm.

Tỷ lệ chuột mang u ngoài da ở các lô từ tuần 5 đến tuần 24. Chỉ số mỡ của chuột ở các lô từ tuần 5 đến tuần 24. So sánh kết quả đại thể giữa các lô từ tuần 5 đến tuần 24. So sánh kết quả vi thể ở các lô ở tuần 5 đến tuần 24.99 9 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.

Cấu trúc của curcumin. Quá trình hình thành và di căn khối u và tác động của curcumin. Sơ đồ tóm tắt quy trình bào chế viên nén nổi lô 2000 viên. Phổ UV-Vis của mẫu chuẩn curcumin, mẫu thử HPTR curcumin/(PVP K30 + Tween 80) và hệ tá dược PVP K30 + Tween 80 trong đệm pH 1,2.

Phổ UV-Vis của mẫu chuẩn curcumin có sử dụng methanol trong giai đoạn đầu xử lý mẫu, mẫu trắng đệm pH 1,2 và mẫu trắng methanol. Sắc ký đồ curcumin chuẩn ở điều kiện 6. Phổ sắc ký đồ dung môi pha mẫu MeOH (1), pha động (2), mẫu trắng (3), mẫu chuẩn (4), mẫu thử (5) và mẫu thử thêm chuẩn (6). Phổ sắc ký đồ mẫu phân hủy trong NaOH 1N (1), mẫu phân hủy trong o H2O2 30% (2), mẫu phân hủy ở 80 C (3), mẫu phân hủy bằng ánh sáng (4), mẫu phân hủy trong đệm pH 8 (5) và mẫu chuẩn (6).

Phổ IR của curcumin NL. Phổ IR của tá dược. Phổ IR của HPTR curcumin. Chồng phổ IR.

Phổ DSC của tá dược. Phổ DSC của curcumin NL. Phổ DSC của HPTR curcumin. Chồng phổ DSC.

SEM của curcumin NL. SEM của tá dược. SEM của HPTR curcumin. Hình ảnh X-quang dạ dày chó.

Tế bào nuôi cấy trong môi trường bình thường; (b) Tế bào xử lý với môi trường chứa DMSO 0,5% (tt/tt) sau 48 giờ (10X, Zoom 5. Hình thái tế bào N87 sau 48 giờ xử lý với các mẫu thử (10X, Zoom 5. Khối u ngoài da trên chuột sau khi uống DMBA. Đại thể dạ dày có khối u.

Đại thể dạ dày bình thường. Vi thể dạ dày ung thư. Vi thể dạ dày bình thường.99 1 1 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 3. Đồ thị tương quan giữa độ hấp thu và nồng độ dung dịch curcumin chuẩn.

Đồ thị tương quan giữa diện tích đỉnh và nồng độ curcumin chuẩn. Đồ thị biểu diễn độ hoà tan của curcumin từ các HPTR với các hệ chất mang khác nhau. Đồ thị biểu diễn độ hoà tan của cucumin nguyên liệu và công thức hệ phân tán rắn N_F3 ở các khoảng thời gian bảo quản. Đồ thị biểu diễn độ hòa tan của curcumin chứa HPTR curcumin:PVP:Tween (1:4: 0,22) và viên nén nổi chứa curcumin nguyên liệu.

Sự thay đổi khối lượng chuột ở các lô thử nghiệm.